泛素化修飾蛋白質組學:泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過異肽鍵與目標蛋白賴氨酸殘基的氨基進行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標記,泛素用親和標簽(通常為6xHis)進行標記,并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結構,經胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質量增加114,因此可作為泛素定位位點的質量標記。用HPLC對樣品進行預分離,使用針對特定殘留結構的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質譜可以鑒定泛素化位點。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。上...
泛素化修飾蛋白質組技術原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度,然后通過高質量的泛素化修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質譜中進行分析定量。技術優(yōu)勢:1、高特異性的修飾類泛抗體;2、高分辨率、高靈敏度質譜儀;應用領域:泛素化修飾還參與了細胞周期、增殖、細胞凋亡、分化、轉錄調控、基因表達、轉錄調節(jié)、信號傳遞、損傷修復、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調控。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關。因此,作為近年來生物化學研究的一個重大成果,它已然成為研究、開發(fā)新藥物的新靶點。蛋白質翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵...
乙?;揎椀鞍捉M學實驗流程:1)組織/細胞破碎,提取蛋白質;2)蛋白酶解成多肽片段;3)對多肽片段進行 iTRAQ 標記;4)高效特異性乙?;贵w富集乙?;揎楇亩?;5)使用 LC-MS/MS 對富集的乙酰化肽段進行序列分析;5)數(shù)據分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町?,并對產生變化的生物學意義進行解釋。乙?;且粋€普遍而重要的蛋白質翻譯后修飾,不僅集中在對細胞染色體結構的影響以及對核內轉錄調控因子方面,而且還影響參與細胞周期和新陳代謝、肌動蛋白聚合控制及多聚谷氨酰胺疾病等方方面面。乙?;粌H存在于真核細胞中,而且越來越多的證據也表明乙?;瑯佑绊懺S多原核細胞的生理生化過程。蛋白質翻譯后...
蛋白質乙酰化修飾組學技術服務:乙?;揎検求w內高度保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調節(jié)。乙?;揎椊M學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙酰化鑒定的影響,再結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。蛋白質泛素化修飾組學技術服務:泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內...
蛋白質翻譯后修飾:蛋白質翻譯后修飾 (Protein translational modifications,PTMs) 通過功能基團或蛋白質的共價添加、調節(jié)亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質的降解來增加蛋白質組的功能多樣性。這些修飾包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙?;⒅|化和蛋白水解,幾乎影響正常細胞生物學和發(fā)病機制的所有方面。因此,識別和理解 PTM 在細胞生物學和疾病療理和預防的研究中至關重要。蛋白質翻譯后修飾 (PTMs) 進一步促進了從基因組水平到蛋白質組復雜性的增加。PTMs 是一種化學修飾,在功能蛋白質組中發(fā)揮關鍵作用,因為它們調節(jié)活性、定位以及與其他細胞分子(如蛋...
甲基化修飾蛋白質組學技術應用領域:基礎醫(yī)學、臨床診斷:生物標志物,疾病機理機制,疾病分型,個性化治理等;生物醫(yī)藥:藥物作用機理,藥效評價,藥物開發(fā)等;農林領域:抗逆脅迫機制,生長發(fā)育機制,育種保護研究等;畜牧業(yè):肉類及乳品質研究,致病機理研究等;微生物領域:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;海洋水產:漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產品安全等。技術優(yōu)勢:采用抗體,特異性高;鑒定通量高, 一次可檢測高可達上千個甲基化修飾位點。在眾多乙酰化修飾的蛋白質中,研究較多的要數(shù)細胞核中包圍DNA的組蛋白了。廣東琥珀?;揎椀鞍踪|組學質譜分析蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些...
泛素化修飾蛋白質組學:泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過異肽鍵與目標蛋白賴氨酸殘基的氨基進行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標記,泛素用親和標簽(通常為6xHis)進行標記,并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結構,經胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質量增加114,因此可作為泛素定位位點的質量標記。用HPLC對樣品進行預分離,使用針對特定殘留結構的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質譜可以鑒定泛素化位點。蛋白質翻譯后修飾可以改變蛋白質的物理、化學性質。江蘇糖基化修飾蛋白質組學...
定量磷酸化蛋白質翻譯修飾組學:蛋白質發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導、細胞周期、生長發(fā)育機理等諸多生物學問題有密切關系。研究蛋白質磷酸化對闡明蛋白質功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術和iTRAQ/TMT/Lable free技術相結合,實現(xiàn)對磷酸化蛋白質組學的定量研究。技術原理:在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標記,然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結合高分辨率質譜完成對樣品的定量分析。蛋白質磷酸化修飾組學是植物體內比較常見的PTM修飾手段。南京氧化修飾蛋白質組學分析琥珀酰化修飾蛋白質組鑒定:蛋白質琥珀?;揎検切陆l(fā)現(xiàn)的一種蛋白質翻譯...
泛素化修飾PRM定量驗證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細胞活動。首先對泛素化的蛋白進行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點上會產生兩個甘氨酸的殘基(K-GG),利用對泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復雜樣本中的泛素化肽段,結合LC-MS/MS蛋白質定量方法,實現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質定性定量分析。蛋白質翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質在翻譯中或翻譯后的化學修飾過程。濟南糖基化修...
糖基化修飾蛋白質組學:蛋白質的糖基化具有異質性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質上的不同糖鏈上。糖基化的異質性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質,在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導致信號分散。此外,對低豐度蛋白質的識別性差導致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質性及其對質譜的影響,標記糖基化位點。從而實現(xiàn)高通量糖蛋白和糖基化位點的識別。常用的糖蛋白分離和富集技術有:a. 凝集素親和技術;b. 肼化學富集;c. 親水性相互...
蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測和鑒定含有修飾基團的肽幾率就越大。修飾位點的占有率:被修飾的蛋白質的百分比低,則檢測到修飾肽的機會會隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識別修飾位點。棕櫚酰化蛋白修飾質譜鑒定方法:S-棕櫚?;闹饕δ苁谴龠M蛋白質與細胞膜的結合。蛋白質可以由一個棕櫚?;M成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質,如豆蔻?;?。由于對S-棕櫚酰化蛋白分析仍然具有挑戰(zhàn)性,由于S-棕櫚酰化修飾蛋白亞水平以及疏水性和潛在不穩(wěn)定的硫代質鏈的S-脂?;?。蛋白質翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質的定位。貴陽蛋白質琥珀?;揎椊M學有哪些...
翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質翻譯后修飾是影響蛋白質功能并調節(jié)整個細胞過程的重要方式,幾乎在每個細胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質對揭示蛋白質的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學計量和豐度存在,這限制了在分析全細胞裂解液時對其的檢測。蛋白質是各種細胞功能比較重要的執(zhí)行者,其功能正常與否決定著生命活動能否有序、高效的進行,而其中翻譯后修飾起著至關重要的作用。翻譯后修飾改變了蛋白質中不同氨基酸殘基上的生物化學官能團,進而改變其化學性質或結構,使得蛋白質具有更為復雜的結構和更為完善的功能,實現(xiàn)更為精細的調節(jié)。蛋白質的翻譯后修飾過程極其復雜,已知的翻譯...
定量磷酸化蛋白質翻譯修飾組學:蛋白質發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導、細胞周期、生長發(fā)育機理等諸多生物學問題有密切關系。研究蛋白質磷酸化對闡明蛋白質功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術和iTRAQ/TMT/Lable free技術相結合,實現(xiàn)對磷酸化蛋白質組學的定量研究。技術原理:在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標記,然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結合高分辨率質譜完成對樣品的定量分析。質譜可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。北京蛋白質乙?;揎椊M學價錢蛋白質學組翻譯后修飾的研究策略:目前,有幾種分析蛋白質翻譯后修飾的策略,包括質譜(M...
根據不同的作用位點,蛋白質乙酰化修飾分為:發(fā)生在蛋白N端的乙?;揎?、發(fā)生在蛋白賴氨酸上的乙?;揎?。前者發(fā)生在90%以上的真核生物新生蛋白上,對于新生蛋白的成熟和細胞定位非常重要,由N乙酰轉移酶(NATs)負責;而后者是一個可逆的過程,主要由賴氨酸乙?;福↘ATs)和賴氨酸去乙?;福↘DACs),賴氨酸的乙?;揎検俏覀兡壳把芯康闹攸c。蛋白質磷酸化修飾應用領域:應用在食品工業(yè)方面,通過人工翻譯磷酸化修飾的蛋白可以普遍用于各種食用蛋白質的改性,以改善蛋白質品質。如,花生蛋白、大豆蛋白、小麥面筋蛋白等。在人工磷酸化修飾的方法下,也可以研究各種蛋白質的功能和相關代謝途徑的調控。在醫(yī)學領域,蛋白...
蛋白質磷酸化修飾定義?在哺乳動物細胞生命周期中,大約有1/3的蛋白質發(fā)生過磷酸化修飾,在脊椎動物基因中,約有5%的基因編碼的蛋白質是參與磷酸化和去磷酸化過程的蛋白激酶和磷酸酶。它可以通過激發(fā)、調節(jié)諸多信號通路進而參與調控生物體的生長、發(fā)育、逆境應激、疾病發(fā)生等多種生命過程,一直是生物學研究的重點與熱點。蛋白磷酸化是指在激酶催化作用下把ATP或者GTP的磷酸基團(P04)轉移到不同種類的氨基酸上(主要包括絲氨酸S、蘇氨酸T、酪氨酸Y),從而使蛋白質發(fā)生翻譯后修飾的過程。蛋白質的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質與底物蛋白質上特定的氨基酸結合。上海蛋白質乙?;揎椊M學鑒定琥珀?;揎椀鞍踪|...
磷酸化修飾蛋白質組學服務:蛋白質的磷酸化修飾是生物體內重要的共價修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡單、靈活、可逆的特性,以及磷酸基團的供體ATP的易得性,使得磷酸化修飾被真核細胞所選擇接受成為一種比較普遍的調控手段。蛋白質的磷酸化和去磷酸化這一可逆過程,幾乎調節(jié)著包括細胞的增殖、發(fā)育、分化、細胞骨架調控、細胞凋亡、神經活動、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動的所有過程,并且可逆的蛋白質磷酸化是目前所知道的比較主要的信號轉導方式。目前已經知道有許多人類疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起,而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導致的后果。乙?;揎椊M學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定...
蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題?覆蓋率:覆蓋率越高,檢測和鑒定含有修飾基團的肽幾率就越大。修飾位點的占有率:被修飾的蛋白質的百分比低,則檢測到修飾肽的機會會隨之減少。如果百分比較高(> 30%),則有助于識別修飾位點。棕櫚酰化蛋白修飾質譜鑒定方法:S-棕櫚?;闹饕δ苁谴龠M蛋白質與細胞膜的結合。蛋白質可以由一個棕櫚酰基組成,也可以與更多棕櫚基或與其他脂質,如豆蔻?;S捎趯-棕櫚?;鞍追治鋈匀痪哂刑魬?zhàn)性,由于S-棕櫚?;揎椀鞍讈喫揭约笆杷院蜐撛诓环€(wěn)定的硫代質鏈的S-脂?;摹T诘鞍追g后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析...
泛素化修飾PRM定量驗證:原理: 泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細胞活動。首先對泛素化的蛋白進行胰酶消化,在賴氨酸的修飾位點上會產生兩個甘氨酸的殘基(K-GG),利用對泛素化賴氨酸(K-GG)具有高親和力的基序抗體,特異性富集復雜樣本中的泛素化肽段,結合LC-MS/MS蛋白質定量方法,實現(xiàn)大規(guī)模泛素化蛋白質定性定量分析。蛋白質翻譯后修飾 (PTMs) 進一步促進了從基因組水平到蛋白質組復雜性的增加。濟...
琥珀酰化修飾蛋白質組技術特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好;通過高分辨率、高掃描速度的質譜,對富集的琥珀?;亩芜M行大規(guī)模鑒定;結合常用的定量技術可對不同樣品間的琥珀?;讲町愡M行定量比較。適用范圍:藥物作用靶點研究;疾病標志物篩選;植物脅迫/抗逆研究;作用機制研究;要求物種具有蛋白質參考數(shù)據庫、EST序列(轉錄組)或基因組注釋信息。應用方向:線粒體代謝、生物合成與代謝、中心代謝途徑、炎癥與疾病。蛋白質的翻譯后修飾調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。武漢蛋白質亞硝基化修飾組學方法蛋白質乙酰化修飾組學技術服務:乙?;揎検求w內高度保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄...
乙?;揎椀鞍捉M學應用方向有什么?1、基礎醫(yī)學、臨床診斷:生物標志物,疾病機理機制,疾病分型,個性化治理等;2、生物醫(yī)藥:藥物作用機理,藥效評價,藥物開發(fā)等;3、微生物領域:致病機理,耐藥機制,病原體-宿主相互作用研究等;4、海洋水產:漁業(yè)資源,海水養(yǎng)殖,漁業(yè)環(huán)境與水產品安全等;5、生物能源、環(huán)境科學領域:發(fā)酵過程優(yōu)化,生物燃料生產,環(huán)境危定風險評估研究等;6、食品營養(yǎng):食品儲藏及加工條件優(yōu)化,食品組分及品質鑒定,功能性食品開發(fā),食品安全監(jiān)檢測等。蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析。浙江蛋白質丙二酰化修飾組學領域什么是蛋白質的翻譯后修飾?蛋白質的翻譯后...
蛋白質磷酸化修飾類型:根據磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質、N-磷酸鹽蛋白質、?;姿猁}蛋白質和S-磷酸鹽蛋白質。1、O-磷酸鹽蛋白質通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 酰基磷酸鹽蛋白質通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的、根據特定抗原-抗體的特異性反應來檢測復雜樣品中的某種蛋白質的免疫生化分析方法。蛋白質磷酸化修飾組學是植物體內比較常見的PTM修飾...
磷酸化修飾蛋白質組學:磷酸化修飾蛋白質組的研究主要集中于真核生物中普遍存在的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的磷酸化。由于體內磷酸化蛋白的含量很低,因此在分析前必須對其進行分離和富集。目前,常用的磷酸化蛋白質的分離和富集技術包括固定化金屬親和色譜、免疫沉淀、強陽離子交換色譜、強陰離子交換色譜、反相色譜等。這些技術被整合和優(yōu)化用于不同生物樣品的磷酸化蛋白質組分析。翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質組學技術可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜與配備電子轉移解離(的高分辨率...
蛋白質乙?;揎椊M學技術:乙?;揎検求w內高度保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,還存在大量的非組蛋白乙酰化修飾參與了代謝通路及代謝酶活性的調節(jié)。乙?;揎椊M學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,再結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩?,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙酰化的鑒定及定量。蛋白質泛素化修飾組學技術:泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細...
蛋白質翻譯后修飾:蛋白質的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質與底物蛋白質上特定的氨基酸結合,調控著底物的酶活性、功能以及三級結構的變化。各種蛋白質翻譯后修飾在信號通路和網絡中發(fā)揮著重要的作用,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導致一系列疾病的發(fā)生。通過實驗的方法鑒定蛋白質翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應的優(yōu)化常常難以實現(xiàn)。而計算的方法則能夠快速、準確的預測酶特異性的底物蛋白質及其修飾位點。蛋白質修飾位點能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質折疊、活性以及之后的功能。廣州蛋白質甲基化修飾組學有哪些類型乙?;揎椀鞍捉M學應用方向:1、乙?;揎椗c細胞基因表達調控、表觀調控、細胞凋亡、細...
蛋白質-蛋白質相互作用是蛋白質發(fā)揮功能的主要機制之一,在DNA損傷修復,自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會導致疾病的發(fā)生.在蛋白質的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?;?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質的電性,疏水性和空間結構等屬性,為與之結合的蛋白提供結合的錨定或產生位阻效應,像一把開關在時空上精確調控蛋白質-蛋白質相互作用的發(fā)生以及動態(tài)變化.結構研究表明,蛋白質之間的相互作用通常由臨近的幾個氨基酸殘基直接結合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設計抑制劑,用于疾...
蛋白質糖基化修飾組學技術服務:糖基化是在酶的控制下,蛋白質或脂質附加上糖類的過程,發(fā)生于內質網和高爾基體等部位。在糖基轉移酶作用下將糖轉移至蛋白質,和蛋白質上的氨基酸殘基共價結合。蛋白質經過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用,有調節(jié)蛋白質功能作用。凝素親和法是目前糖蛋白質組學中應用比較普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結合蛋白質,能專一識別某一特殊結構的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結合,它們與糖鏈可逆非共價結合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,...
蛋白質翻譯后修飾組學是什么?蛋白質翻譯后修飾是指蛋白質在翻譯中或翻譯后經歷的一個共價加工過程,即通過1個或幾個氨基酸殘基加上修飾基團或通過蛋白質水解剪去基團而改變蛋白質的性質。蛋白質氨基酸序列的特定位置可以與化學基團或者小分子量的蛋白共價結合從而發(fā)生蛋白質翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),相較于沒有發(fā)生修飾的蛋白,PTMs會導致特定序列分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析;通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列...
蛋白質乙?;揎椊M學技術:乙?;揎検求w內高度保守的可逆轉的蛋白修飾,對細胞核內轉錄調控因子的刺激有著非常重要的作用。此外,還存在大量的非組蛋白乙?;揎梾⑴c了代謝通路及代謝酶活性的調節(jié)。乙酰化修飾組學技術服務采用肽段預分離降低高豐度組蛋白對蛋白乙?;b定的影響,再結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。蛋白質泛素化修飾組學技術:泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)介導了真核生物體內80%~85%的蛋白質降解。此外,泛素化修飾還可以直接影響蛋白質的活性和定位,調控包括細胞周期、細胞凋亡、轉錄調控、DNA 損傷修復以及免疫應答等在內的多種細...
蛋白質磷酸化修飾類型:根據磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質分為4類,即O-磷酸鹽蛋白質、N-磷酸鹽蛋白質、?;姿猁}蛋白質和S-磷酸鹽蛋白質。1、O-磷酸鹽蛋白質通過羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質通過精氨酸、賴氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 ?;姿猁}蛋白質通過天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質通過半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的、根據特定抗原-抗體的特異性反應來檢測復雜樣品中的某種蛋白質的免疫生化分析方法。目前,發(fā)現(xiàn)的比較常見的修飾類型是糖基化、泛素化和磷...
蛋白質翻譯后修飾組學技術原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復雜程度,然后通過高質量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集,之后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質譜中進行分析,通過相應的數(shù)據庫檢索匹配,一次可鑒定成百上千個修飾位點。蛋白質磷酸化位點分析樣品經酶解后,用 TiO2 微球對磷酸化肽段進行富集,富集后的產物由質譜分析,并通過軟件完成數(shù)據檢索。琥珀酰化修飾蛋白質組技術特點:采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好。在細胞中,乙?;揎椀姆磻梢阴;D移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。濟南亞硝基化修...