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河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-04-19

泛素化修飾蛋白質(zhì)組技術(shù)原理:首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過(guò)高質(zhì)量的泛素化修飾類抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,之后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析定量。技術(shù)優(yōu)勢(shì):1、高特異性的修飾類泛抗體;2、高分辨率、高靈敏度質(zhì)譜儀;應(yīng)用領(lǐng)域:泛素化修飾還參與了細(xì)胞周期、增殖、細(xì)胞凋亡、分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號(hào)傳遞、損傷修復(fù)、炎癥免疫等幾乎一切生命活動(dòng)的調(diào)控。泛素化心血管等疾病的發(fā)病密切相關(guān)。因此,作為近年來(lái)生物化學(xué)研究的一個(gè)重大成果,它已然成為研究、開(kāi)發(fā)新藥物的新靶點(diǎn)。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在許多細(xì)胞過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)糖基化修飾組學(xué)技術(shù)服務(wù):糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過(guò)程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位。在糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價(jià)結(jié)合。蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對(duì)蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作用。凝素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用比較普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識(shí)別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價(jià)結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來(lái)。上海磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn):能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。

甲基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)原理:目前用于甲基化蛋白質(zhì)組分析的甲基化肽段富集抗體分為精氨酸甲基化(Me-R)抗體和賴氨酸甲基化(Me-K)抗體兩大類。根據(jù)氨基酸殘基上所含甲基化修飾基團(tuán)數(shù)量的不同,精氨酸甲基化(Me-R)抗體又包括:?jiǎn)渭谆彼幔∕MA)抗體、非對(duì)稱二甲基化精氨酸(ADMA)抗體和對(duì)稱二甲基化精氨酸(SDMA)抗體;賴氨酸甲基化(Me-K)抗體又包括:賴氨酸單甲基化(K-Me)抗體、賴氨酸二甲基化(K-2Me)抗體和賴氨酸三甲基化(K-3Me)抗體。其中,Me-R的各類抗體需要單獨(dú)使用,而Me-K抗體可以混合使用。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)能夠影響蛋白的多種屬性,包括蛋白質(zhì)折疊、活性以及之后的功能。

定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學(xué):蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等諸多生物學(xué)問(wèn)題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合,實(shí)現(xiàn)對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究。技術(shù)原理:在磷酸化肽段富集前先進(jìn)行 iTRAQ/TMT 標(biāo)記,然后通過(guò) TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對(duì)樣品的定量分析。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?貴州蛋白質(zhì)琥珀?;揎椊M學(xué)質(zhì)譜鑒定

磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)是原核生物和真核生物中比較重要的調(diào)控修飾形式。河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組技術(shù)特點(diǎn):采用主流抗體親和富集方法,特異性高,富集效率好;通過(guò)高分辨率、高掃描速度的質(zhì)譜,對(duì)富集的琥珀酰化肽段進(jìn)行大規(guī)模鑒定;結(jié)合常用的定量技術(shù)可對(duì)不同樣品間的琥珀酰化水平差異進(jìn)行定量比較。適用范圍:藥物作用靶點(diǎn)研究;疾病標(biāo)志物篩選;植物脅迫/抗逆研究;作用機(jī)制研究;要求物種具有蛋白質(zhì)參考數(shù)據(jù)庫(kù)、EST序列(轉(zhuǎn)錄組)或基因組注釋信息。應(yīng)用方向:線粒體代謝、生物合成與代謝、中心代謝途徑、炎癥與疾病。河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)