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浙江人體原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-01-31

原代肝細(xì)胞也可以用于Organ-on-a-chip的構(gòu)建。Organ-on-a-chip是一項(xiàng)創(chuàng)新性的科技成果,它在載玻片大小的芯片上構(gòu)建了一個(gè)完整的生理組織微系統(tǒng),其中包含有原代肝細(xì)胞、肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞、生物流體和機(jī)械力所需微環(huán)境的關(guān)鍵要素。這個(gè)微型肝臟模型可以在體外模擬人體肝臟的主要結(jié)構(gòu)功能特征和復(fù)雜的組織間聯(lián)系,為藥物藥效評價(jià)、藥物安全性評價(jià)、化妝品安全性評價(jià)、食品安全性評價(jià)、環(huán)境保護(hù)評價(jià)等提供了一種全新的方法和手段。 這個(gè)微型肝臟模型的研發(fā),是在對傳統(tǒng)的肝臟模型進(jìn)行改進(jìn)和創(chuàng)新的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的。傳統(tǒng)的肝臟模型通常是基于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法,但這些方法存在著很多的局限性和缺陷。例如,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不僅存在著倫理和道德問題,而且還存在著種屬差異、生理反應(yīng)差異等問題;而體外細(xì)胞培養(yǎng)則存在著細(xì)胞失活、細(xì)胞分化等問題。因此,Organ-on-a-chip的出現(xiàn),填補(bǔ)了這些傳統(tǒng)方法的空白,為科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用提供了更加可靠和有效的手段。立沃生物原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)合作服務(wù),包括細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)合作、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目合作等。浙江人體原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)

    原代肝細(xì)胞的融合度是影響其生長和增值能力的重要因素之一。當(dāng)融合度達(dá)到70%以上時(shí),細(xì)胞開始進(jìn)入高度同步狀態(tài),細(xì)胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮,從而促進(jìn)了細(xì)胞的生長和增殖。但是,如果融合度低于70%,細(xì)胞之間的相互作用就會(huì)受到限制,導(dǎo)致細(xì)胞的增值能力受到限制,無法達(dá)到100%。此外,細(xì)胞之間的距離也是影響細(xì)胞生長和增值能力的重要因素之一。當(dāng)細(xì)胞之間的距離剛好是黃金分割點(diǎn)時(shí),細(xì)胞開始進(jìn)入高度同步狀態(tài),細(xì)胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮,從而促進(jìn)了細(xì)胞的生長和增殖。但是,如果細(xì)胞之間的距離超過了黃金分割點(diǎn),細(xì)胞就無法進(jìn)入高度同步狀態(tài),從而導(dǎo)致細(xì)胞的增值能力受到限制。細(xì)胞的培養(yǎng)密度也是影響細(xì)胞生長和增值能力的重要因素之一。低密度培養(yǎng)雖然可以保持細(xì)胞的功能,但是細(xì)胞的增值能力會(huì)很快丟失。而高密度培養(yǎng)可以維持細(xì)胞的功能一段時(shí)間,但是也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞之間的相互作用受到限制,從而影響細(xì)胞的生長和增殖。因此,在進(jìn)行原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí),需要根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)密度,以保證細(xì)胞的生長和增值能力得到正常的發(fā)揮。 佛山鮭魚原代肝細(xì)胞培養(yǎng)原代肝細(xì)胞不能傳代和長期培養(yǎng),會(huì)丟失肝細(xì)胞分化特性與功能,通過誘導(dǎo)去分化做成肝祖細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)。

   在進(jìn)行原代肝細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常需要對分離得到的肝細(xì)胞進(jìn)行特殊的處理或篩選,以提高肝細(xì)胞的存活率和純度。以下是一些常見的處理或篩選方法:1.密度梯度離心:密度梯度離心是一種常用的分離和篩選肝細(xì)胞的方法。通過使用密度梯度介質(zhì)(如Percoll或Ficoll),可以將肝細(xì)胞與其他細(xì)胞分離出來,從而提高肝細(xì)胞的純度。2.選擇性貼壁:選擇性貼壁是一種基于肝細(xì)胞和其他細(xì)胞在培養(yǎng)皿上的貼壁特性不同的篩選方法。肝細(xì)胞通常會(huì)在培養(yǎng)皿上貼壁生長,而其他細(xì)胞則不會(huì)。通過選擇合適的培養(yǎng)條件和時(shí)間,可以篩選出貼壁生長的肝細(xì)胞。3.流式細(xì)胞術(shù):流式細(xì)胞術(shù)是一種基于細(xì)胞表面標(biāo)志物的篩選方法。通過使用熒光標(biāo)記的抗體,可以識(shí)別和篩選出表達(dá)特定標(biāo)志物的肝細(xì)胞。4.細(xì)胞篩選:細(xì)胞篩選是一種基于細(xì)胞形態(tài)和功能的篩選方法。通過觀察細(xì)胞的形態(tài)和功能特征,可以篩選出符合要求的肝細(xì)胞。以上是一些常見的原代肝細(xì)胞處理或篩選方法,不同的方法適用于不同的實(shí)驗(yàn)需求和研究目的。在進(jìn)行原代肝細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),需要根據(jù)具體情況選擇合適的處理或篩選方法,以提高肝細(xì)胞的存活率和純度。

原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細(xì)胞培養(yǎng)是一種常用的實(shí)驗(yàn)方法,但在培養(yǎng)過程中,細(xì)胞可能會(huì)受到endotoxin的污染,這會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 endotoxin是一種由細(xì)菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì),可以引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞損傷。在原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中,endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)器具或細(xì)胞本身。因此,需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑,例如聚陽離子樹脂(Polyclonal Cationic Resin,PCR)或聚乙烯醇(Polyvinyl Alcohol,PVA)。這些去除劑可以吸附endotoxin,從而減少其對細(xì)胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡單,只需要將其加入培養(yǎng)基中,然后將細(xì)胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測試劑盒來檢測培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測結(jié)果顯示endotoxin含量較高,可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測試劑盒外,還可以采取一些預(yù)防措施來減少endotoxin的污染。例如,使用無菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細(xì)胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當(dāng)?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染,保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。立沃生物的原代肝細(xì)胞可以提供多種檢測服務(wù),包括細(xì)胞活率、細(xì)胞數(shù)、endotoxin檢測等。

貼壁培養(yǎng)是一種常用的細(xì)胞培養(yǎng)方法,可以使原代肝細(xì)胞在培養(yǎng)皿表面附著生長,形成單層細(xì)胞群落。原代肝細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)需要注意以下幾點(diǎn): 1. 分離和準(zhǔn)備細(xì)胞:從新鮮的動(dòng)物肝臟中分離出原代肝細(xì)胞后,需要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量檢測,確保細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量符合要求。 2. 培養(yǎng)基的選擇:原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)基需要選擇適合其生長和代謝的培養(yǎng)基,常用的培養(yǎng)基包括DMEM、RPMI-1640等。 3. 培養(yǎng)皿的涂層:為了使原代肝細(xì)胞能夠附著生長,需要在培養(yǎng)皿表面涂層一定濃度的膠原蛋白、明膠或者其他細(xì)胞黏附因子。 4. 細(xì)胞接種和培養(yǎng):將準(zhǔn)備好的原代肝細(xì)胞接種到涂層好的培養(yǎng)皿中,加入適量的培養(yǎng)基,放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。需要注意的是,原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間較短,一般在3-5天左右,因此需要及時(shí)更換培養(yǎng)基和進(jìn)行細(xì)胞觀察。 原代肝細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)可以通過在培養(yǎng)皿上加一定的的吸附涂層來達(dá)到讓原代肝細(xì)胞快速貼壁的效果。立沃生物的原代肝細(xì)胞配套提供多種細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑,包括細(xì)胞復(fù)蘇、鋪板、維持培養(yǎng)基和培養(yǎng)酶等。東莞羅非魚原代肝細(xì)胞種類

立沃生物科技有限公司原代肝細(xì)胞是從健康肝臟中提取后體外培養(yǎng)的,保留了肝臟的特性和功能。浙江人體原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)

原代肝細(xì)胞的來源供體來源很多。鑒于人原代肝細(xì)胞存在數(shù)量稀缺和倫理道德等問題,研究人員嘗試從動(dòng)物肝臟中分離原代肝細(xì)胞,用來體外培養(yǎng)并進(jìn)行研究。使用較多的是嚙齒動(dòng)物,還有一些哺乳動(dòng)物和魚類。目前常用的供體品系有樹鼩、大小鼠、豬、新西蘭兔、比格犬、貓、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚等。 原代肝細(xì)胞除了供體品系不同以外,也會(huì)根據(jù)細(xì)胞來源的供體數(shù),分為單供體和多供體。供體數(shù)的選擇主要取決于實(shí)驗(yàn)的研究目的。 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用場景也很多。隨著技術(shù)水平的不斷提高,原代培養(yǎng)的動(dòng)物和人肝細(xì)胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究:①探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動(dòng)力學(xué)的研究;②預(yù)測和解釋藥物與藥物之間的相互作用;③研究藥物的細(xì)胞毒性等。浙江人體原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)