蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對翻譯后的蛋白質(zhì)進行共價加工的過程。它通過在一個或多個氨基酸殘基加上修飾基團,可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì),進而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會導致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對翻譯后修飾方式進行鑒定和定量。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。浙江蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學分析方法
蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學:磷酸化蛋白質(zhì)是由蛋白激酶將ATP或GTP分子上的磷酸基團轉(zhuǎn)移到底物蛋白特定的氨基酸側(cè)鏈上形成的。蛋白質(zhì)磷酸化是一種可逆的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。在哺乳動物的細胞生命周期中,至少有三分之一的蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化修飾。磷酸化修飾參與許多信號轉(zhuǎn)導途徑和細胞代謝過程,且許多已知的疾病也與蛋白質(zhì)的異常磷酸化有關。因此,對磷酸化蛋白質(zhì)組進行定量研究,尋找差異表達的磷酸化蛋白質(zhì),有助于發(fā)現(xiàn)疾病的生物標志物和尋找新的具有診療潛力的藥物靶標。杭州琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學分析價格蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有全方面性。
翻譯后修飾蛋白組:翻譯后修飾蛋白組分析是指在組學水平上對存在翻譯后修飾的蛋白質(zhì)進行分析。翻譯后修飾蛋白組是指細胞或組織等整體水平上的翻譯后修飾蛋白。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾(Post Translational Modifications, PTMs)是蛋白質(zhì)在翻譯中或翻譯后經(jīng)歷的一個共價加工過程。蛋白翻譯后修飾通過在一個或多個氨基酸殘基上加修飾基團或通過蛋白質(zhì)水解去基團而改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的功能。經(jīng)過翻譯后修飾的蛋白質(zhì)稱為翻譯后修飾蛋白。目前,已知的蛋白質(zhì)翻譯后修飾主要包括糖基化、磷酸化、乙?;?、泛素化、二硫鍵配對、甲基化和亞硝基化等等。
蛋白質(zhì)學組翻譯后修飾自下而上分析策略:常用的糖蛋白分離和富集技術有:a. 凝集素親和技術;b. 肼化學富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化:泛素是一種由76個氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過異肽鍵與目標蛋白賴氨酸殘基的氨基進行共價連接。泛素化蛋白的富集主要基于標記,泛素用親和標簽(通常為6xHis)進行標記,并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu),經(jīng)胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質(zhì)量增加114,因此可作為泛素定位位點的質(zhì)量標記。用HPLC對樣品進行預分離,使用針對特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學具有可靠性。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學意義?可以使蛋白質(zhì)具有生物活性,可以發(fā)揮相應的功能。翻譯是蛋白質(zhì)生物合成(基因表達中的一部分,基因表達還包括轉(zhuǎn)錄)過程中的第二步(轉(zhuǎn)錄為第1步),翻譯是根據(jù)遺傳密碼的中心法則,將成熟的信使RNA分子(由DNA通過轉(zhuǎn)錄而生成)中“堿基的排列順序”(核苷酸序列)解碼,并生成對應的特定氨基酸序列的過程。但也有許多轉(zhuǎn)錄生成的RNA,如轉(zhuǎn)運RNA(tRNA)、核糖體RNA(rRNA)和小核RNA(snRNA)等并不被翻譯為氨基酸序列。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質(zhì)譜進行分析。哈爾濱蛋白質(zhì)棕櫚?;揎椊M學價格
蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術優(yōu)點:能夠特異鑒定單個磷酸化位點。浙江蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學分析方法
蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學:翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學是一種基于肽段分析的技術。對于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導致信號分散。此外,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標記糖基化位點。浙江蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學分析方法
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