南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA，檢測試劑盒具備檢測快速、操作簡單、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點(diǎn)。蕞低檢測限可以達(dá)到fg級(jí)別。試劑盒配套有CHODNA定量參考品，已溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的E.coli宿主DNA，產(chǎn)品具備檢測快速、操作簡單、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點(diǎn)。蕞低檢測限可以達(dá)到fg級(jí)別。試劑盒配套有E.coliDNA定量參考品。產(chǎn)品檢測方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測定量分析。泰州HEK293T細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測：實(shí)時(shí)熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理和方法：實(shí)時(shí)熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時(shí)，在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號(hào)指示，通過實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR體系中的熒光信號(hào)，對(duì)樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR可實(shí)時(shí)檢測產(chǎn)物的生成量，通過加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度，從而達(dá)到檢測宿主細(xì)胞殘留DNA含量的目的。南京E1B殘留DNA檢測特點(diǎn)畢赤酵母宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒。

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計(jì)的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯(cuò)誤、制備過程震蕩時(shí)間過長等：人員上崗前應(yīng)接受多面培訓(xùn)并做到熟練操作，考核合格后方可上崗。④移液器未校準(zhǔn)或品質(zhì)問題導(dǎo)致量取不準(zhǔn)：定期對(duì)移液器進(jìn)行校準(zhǔn)并選擇好品質(zhì)移液器。

宿主細(xì)胞殘留DNA是指可能出現(xiàn)于生物制品中由宿主組織細(xì)胞產(chǎn)生的DNA片段或更長分子。目前，生物制品常用宿主包括：哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中的幼倉鼠腎細(xì)胞系、中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)、小鼠骨髓瘤NS0細(xì)胞系、人胚腎細(xì)胞系(HEK-293)、酵母菌和大腸桿菌等。重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等生物制品由連續(xù)傳代的微生物或動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)，雖然經(jīng)過復(fù)雜的純化工藝，但產(chǎn)品中仍可能有宿主細(xì)胞殘留DNA。殘留的宿主細(xì)胞DNA一般有相同的基本結(jié)構(gòu)單位，但存在的長度和形式各異，它們均可導(dǎo)致傳染性、致ai性、免疫原性和突變性等風(fēng)險(xiǎn)；鑒于上述風(fēng)險(xiǎn)，國內(nèi)外監(jiān)管部門分別出臺(tái)了相應(yīng)的指導(dǎo)原則并提供了宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的方法。如何高效完成宿主細(xì)胞殘留DNA檢測？

各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求：各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測方法，用于驗(yàn)證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對(duì)終產(chǎn)品的產(chǎn)品放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜帶外源DNA的藥品流入市場。與此同時(shí)，殘留DNA的檢測方法也在不斷升級(jí)和改進(jìn)，研究者們旨在能夠更精確更快速地檢測含量較低的宿主DNA。我國對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：鑒于外源性DNA對(duì)機(jī)體的潛在危害，自19世紀(jì)末，我國藥品相關(guān)機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部、國家藥品監(jiān)督管理局等頒布的一系列文件中都對(duì)殘余細(xì)胞DNA有明確的規(guī)定?！度擞弥亟MDNA制品質(zhì)量控制要點(diǎn)》中要求必須用敏感的方法測定來源于宿主細(xì)胞的殘余DNA含量，這對(duì)于用哺乳動(dòng)物傳代細(xì)胞(轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系)生產(chǎn)的制品尤為重要，一般認(rèn)為殘余DNA含量小于100pg/劑是安全的，但應(yīng)視制品的用途、用法和使用對(duì)象而決定可接受的限度。美國FDA對(duì)Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求。杭州E1B殘留DNA檢測公司

HEK293宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒。泰州HEK293T細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品

美國藥典（USP）對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對(duì)于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量?！睹绹幍洹?USP40－NF35)通則＜1130＞收錄了3種外源性DNA殘留量測定的方法，分別為DNA探針雜交法、閾值法和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCＲ)法。

歐洲藥典（EP）對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：歐洲藥品管理局指出需要對(duì)連續(xù)傳代哺乳細(xì)胞殘留DNA的去除過程進(jìn)行工藝驗(yàn)證，旨在確認(rèn)去除殘留DNA的主要步驟，并確保此工藝程序可以將終產(chǎn)品中的殘留DNA控制在允許范圍［4］?！稓W洲藥典》(EP9．3)通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10ng/劑量，但對(duì)個(gè)別疫苗的殘留DNA限定標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格，如甲型肝炎滅活疫苗中的殘留DNA不得超過100pg/劑量，乙型肝炎疫苗中的DNA殘留量不得超過10pg/劑量。 泰州HEK293T細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品