特異性探針有三種形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是**常采用的探針。RNA探針用途很廣,也容易獲得,但其不穩(wěn)定性限制了其商業(yè)用途。cDNA探針的獲得是,將特定的基因片段裝載到質(zhì)?;蚴删w中,經(jīng)過擴增、酶切、純化等復(fù)雜的步驟,才能得到一定長度的cDNA探針。這一過程比較復(fù)雜,有相應(yīng)條件的實驗室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下,由核酸合成儀來完成,可廉價獲得大量的此類探針。質(zhì)量也相對來說更為穩(wěn)定。由于cDNA探針長度通常為數(shù)百至數(shù)千個堿基,所以有良好的信號放大作用,但其滲透性比較差。寡核苷酸探針一般為十?dāng)?shù)個至數(shù)十個堿基,滲透性強,但信號放大作用則較差,合成的多相寡核苷酸探針,敏感性可以達到cDNA探針?biāo)?。探針卡?yīng)用在IC尚未封裝前,針對裸晶系以探針做功能測試,篩選出不良品、再進行之后的封裝工程。虹口區(qū)特制探針現(xiàn)價
DNA探針根據(jù)其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,產(chǎn)生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。崇明區(qū)挑選探針生產(chǎn)廠家原子序數(shù)12至22的元素要在真空下進行成分測定,原子序數(shù)12以內(nèi)的元素需要增添一些特殊設(shè)備才能分析。
電子探針又稱微區(qū)X射線光譜分析儀、X射線顯微分析儀。其原理是利用聚焦的高能電子束轟擊固體表面,使被轟擊的元素激發(fā)出特征X射線,按其波長及強度對固體表面微區(qū)進行定性及定量化學(xué)分析。主要用來分析固體物質(zhì)表面的細小顆?;蛭⑿^(qū)域,**小范圍直徑為1μm左右。分析元素從原子序數(shù)3(鋰)至92(鈾)。***感量可達10-14至10-15g。近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置,可在觀察微區(qū)形貌的同時逐點分析試樣的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)。廣泛應(yīng)用于地質(zhì)、冶金材料、水泥熟料研究等部門。如圖《電子探針示意圖》所示。
③末端標(biāo)記法(又叫尾標(biāo))。利用末端轉(zhuǎn)移酶可進行“尾標(biāo)”,尾標(biāo)適用于寡核苷酸探針標(biāo)記,寡核苷酸探針多用于核酸“點”突變的檢測,該探針可用核酸合成儀人工合成,克隆出的探針一般較長,特異性好,標(biāo)記量大,雜交的檢出信號強。探針合成的注意事項①合成探針的長短,一般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯誤,雜交時間長,合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應(yīng)含40%~60%,一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過4個,以免非特異性雜交產(chǎn)生。③探針自身序列內(nèi)應(yīng)無互補區(qū)域,以免產(chǎn)生“發(fā)夾”結(jié)構(gòu),影響雜交??傊?,一個好的探針**終要在實踐中才能加以確認(rèn)??梢赃M行點、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi)、原子序數(shù)4以上的所有元素;但是對原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差。常規(guī)分析的典型檢測相對靈敏度為萬分之一,在有些情況下可達十萬分之一。檢測的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進行點、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對原子序數(shù)高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺電子探針儀。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,還能觀察和研究微觀形貌、晶體結(jié)構(gòu)等。(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。嘉定區(qū)品牌探針按需定制
當(dāng)某一X射線光子進入計數(shù)管后,管內(nèi)氣體電離,并在電場作用下產(chǎn)生電脈沖信號。虹口區(qū)特制探針現(xiàn)價
細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因。各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫。然后用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產(chǎn)生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。將此重組質(zhì)粒標(biāo)記后作探針進一步鑒定,亦可經(jīng)DNA序列分析鑒定其基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。虹口區(qū)特制探針現(xiàn)價
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