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缺口平移法是**常用的探針標記法,反應體系的主要成分有DNA酶I(DNase I)、大腸桿菌DNA聚合酶I(DNA polymerase I)、三種三磷酸脫氧核糖核苷酸、一種同位素標記的核苷酸(如dATP、dTTP、dCTP,”P—dGTP),其原理如圖1。首先用適當濃度的DNA酶I在探針DNA雙鏈分子上隨機切開若干個缺口(不是切斷DNA或?qū)⑵浣到猓缓笤俳柚贒NA聚合酶I的5 '→3'的外切酶活性,切去5’末端的核苷酸;同時又利用該酶的5’→3’聚合酶活性,使32P標記的互補核苷酸補入缺口.DNA聚合酶I的這兩種活性的交替作用,使缺口不斷向3’的方向移動,DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標記的核苷酸所取代。由于反應體系中含有同位素標記的單核苷酸,使新合成的鏈帶有同位素標記,所以缺口平移實際上是同位素標記的核苷酸取代了原DNA鏈中不帶同位素的同種核苷酸。除H、He、Li、Be等幾個較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進行定性和定量分析。黃浦區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
②隨機引物法。隨機引物是指含有各種可能排列順序的寡聚核苷酸片斷的混合物,因此它可以與任意核苷酸序列雜交,起到聚合酶反應的引物作用。將待標記的DNA探針片斷變性后與隨機引物一起雜交,然后以此雜交的寡聚核苷酸為引物,在大腸桿菌DNA聚合酶I大斷段(KlenowFragment)催化下,合成與探針DNA互補的DNA鏈,當在反應體系中含有a-32P-dNTP時,即形成放射性同位素標記的DNA探針。具有上述優(yōu)點,可代替缺口平移法。此外大小、單雙DNA均可標記,標記均勻,標記率高,但也不能標記環(huán)狀DNA。隨機引物法標記探針一般長400~600bp。崇明區(qū)優(yōu)勢探針維修價格能進行微區(qū)分析??煞治鰯?shù)個μm3內(nèi)元素的成分。
DNA探針根據(jù)其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發(fā)展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,產(chǎn)生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。
電子探針又稱微區(qū)X射線光譜分析儀、X射線顯微分析儀。其原理是利用聚焦的高能電子束轟擊固體表面,使被轟擊的元素激發(fā)出特征X射線,按其波長及強度對固體表面微區(qū)進行定性及定量化學分析。主要用來分析固體物質(zhì)表面的細小顆?;蛭⑿^(qū)域,**小范圍直徑為1μm左右。分析元素從原子序數(shù)3(鋰)至92(鈾)。***感量可達10-14至10-15g。近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置,可在觀察微區(qū)形貌的同時逐點分析試樣的化學成分及結構。廣泛應用于地質(zhì)、冶金材料、水泥熟料研究等部門。如圖《電子探針示意圖》所示。探針卡是一種測試接口,主要對裸芯進行測試,通過連接測試機和芯片,通過傳輸信號對芯片參數(shù)進行測試.。
電子探針可以對試樣中微小區(qū)域(微米級)的化學組成進行定性或定量分析??梢赃M行點、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。還能全自動進行批量(預置9999測試點)定量分析。由于電子探針技術具有操作迅速簡便(相對復雜的化學分析方法而言)、實驗結果的解釋直截了當、分析過程不損壞樣品、測量準確度較高等優(yōu)點,故在冶金、地質(zhì)、電子材料、生物、醫(yī)學、考古以及其它領域中得到日益***地應用,是礦物測試分析和樣品成分分析的重要工具。對于任意一個給定的入射角θ有一個確定的波長λ滿足衍射條件。奉賢區(qū)優(yōu)勢探針現(xiàn)價
電子探針和掃描電鏡在電子光學系統(tǒng)的構造基本相同,它們常常組合成單一的儀器。黃浦區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細胞基因轉(zhuǎn)錄或病毒復制過程中得到標記的,標記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測。例如,在篩選逆轉(zhuǎn)錄病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)的基因組DNA克隆時,因無DNA探針可利用,就利用HIV的全套標記mRNA作為探針,成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進行中的轉(zhuǎn)錄分析(nuclearrunontranscrip-tionassay)時,在體外將細胞核分離出來,然后在α-32P-ATP的存在下進行轉(zhuǎn)錄,所合成mR-NA均摻入同位素而得到標記,此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾膜上的某一特定的基因的DNA進行雜交,便可反映出該基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài),這是一種反向探針實驗技術。黃浦區(qū)特制探針生產(chǎn)廠家
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