血清血漿MicroRNA提取:將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL洗滌液至吸附柱內(nèi),12,000rpm4℃離心1min,棄收集管內(nèi)廢液。將吸附柱放回收集管內(nèi),12,000rpm4℃離心2min,離去殘留的洗滌液。取出吸附柱,放入新的1.5mL離心管內(nèi),加入30-50μL洗脫液,靜置3min,12,000rpm4℃離心2min,收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步實(shí)驗(yàn)或-20℃保存。血清血漿MicroRNA提取的注意事項(xiàng):裂解液、洗滌液含有刺激性化學(xué)物質(zhì),操作過程請(qǐng)做好防護(hù)措施,避免直接接觸皮膚,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛,請(qǐng)立即用清水或生理鹽水沖洗,必要時(shí)請(qǐng)就醫(yī)。消化液、RNACarrier請(qǐng)于-20℃存放,避免反復(fù)凍融。DNA提取的質(zhì)量可以通過測定純度、濃度和完整性來評(píng)估。佛山無需氯仿DNA提取
外泌體DNA提取過程:操作步驟:1.請(qǐng)自行準(zhǔn)備:無水乙醇、1.5mL離心管。2.取出洗滌液,按以下操作:a)洗滌液A:21mL加入9mL無水乙醇;42mL加入18mL無水乙醇,混勻。b)洗滌液B:9mL加入21mL無水乙醇;18mL加入42mL無水乙醇,混勻。c)配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀,可在37℃溶解,搖勻后使用。3.取1.5mL離心管,加入200μL外泌體樣本,再加入200μL裂解液及20μL消化液,漩渦震蕩10秒,充分混勻,65℃水浴10分鐘。4.加入0.9mL無水乙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響DNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。高脂肪含量RNA提取可測序RNA提取是分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究中的重要步驟。
RNA提取和DNA提取實(shí)驗(yàn)中常見問題及過程中的注意事項(xiàng):降解:降解問題是RNA制備中常常到的問題。因?yàn)樵赗NA提取過程中,樣品儲(chǔ)存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會(huì)導(dǎo)致降解。對(duì)于DNA提取,降解不是一個(gè)大問題,因?yàn)閷?duì)于PCR,DNA可以被剪切并且工作正常,如果不希望有較多剪切的DNA,可以使用弱裂解的方法。PCR清理時(shí)的注意事項(xiàng):PCR凈化其實(shí)并不是DNA提取技術(shù)本身,但它是一種效率高且簡單的技術(shù),它只是添加高濃度的結(jié)合鹽(通常每體積PCR反應(yīng)3-5體積鹽)和離心來過濾。在實(shí)驗(yàn)過程中,PCRClean-up試劑盒出現(xiàn)故障也會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)功虧一簣。因?yàn)樵赑CR反應(yīng)中有較多吸收260度紫外線的物質(zhì),比如:核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以,PCR凈化試劑盒經(jīng)常無法正常工作可能是由于PCR反應(yīng)失敗所造一般成較難清理。
骨組織RNA提取方法及步驟:適用于快速提取骨組織細(xì)胞總RNA,使用獨(dú)有基因組DNA清理柱技術(shù)可有效清理電泳可見gDNA殘留,RNA可用于反轉(zhuǎn)錄PCR,熒光定量PCR等。骨組織堅(jiān)硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白(蛋白多糖)和RNA難以分離,無法用傳統(tǒng)Trizol法進(jìn)行高質(zhì)量提取。本方法采用獨(dú)有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液,并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時(shí)獨(dú)特基因組DNA清理柱技術(shù)可以有效清理gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,離心沉淀去除多糖和次級(jí)代謝產(chǎn)物,然后裂解混合物用乙醇調(diào)節(jié)RNA結(jié)合吸附到基因組DNA清理柱,然后RNA被選擇性洗脫濾過,吸附在基因組DNA清理柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清理掉DNA。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreeH20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。DNA提取的步驟包括細(xì)胞破碎、DNA分離、純化和洗滌等。
microRNA提取方法及步驟:室溫放置5分鐘以充分分離核酸蛋白復(fù)合物。加入200μl氯仿,劇烈振蕩15秒。室溫放置2-3分鐘,13,000rpm離心10分鐘。小心取上清(約600μl)轉(zhuǎn)入到新的離心管,加入1.5倍體積的無水乙醇(必須是室溫的,通常900μl),渦旋混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心,立刻接下步。將混合物(每次小于700μl,多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm離心30-60秒,棄掉廢液。加700μlWashSolution1(請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。加入500μlWashSolution2/3(請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm離心30秒,棄掉廢液。加入500μlWashSolution2/3,重復(fù)一遍。RNA提取可以使用不同的組織或細(xì)胞類型來比較RNA的表達(dá)。南京腦脊液DNA提取企業(yè)
DNA提取的原則,核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子。佛山無需氯仿DNA提取
DNA提取的一些問題,提取的細(xì)菌基因組DNA有降解,為什么?確認(rèn)選用的培養(yǎng)菌體是否新鮮,如果菌體需要保存時(shí),請(qǐng)于-80℃保存。起始菌液量過多,導(dǎo)致菌液裂解不充分,部分DNA降解。菌體本身富含DNA酶活性,加入Digestionsolution后再加20uL0.5MEDTA溶液來抑制內(nèi)源性核酸酶。提取的基因組DNA生物活性差,為什么?提取的基因組DNA中鹽分濃度過高,請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說明書要求進(jìn)行。佛山無需氯仿DNA提取
蘇州英澤生物醫(yī)藥科技有限公司總部位于張家港經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)(市高新技術(shù)創(chuàng)業(yè)服務(wù)中心)F幢3樓,是一家生物醫(yī)藥和醫(yī)療領(lǐng)城內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓及相 關(guān)的技術(shù)服務(wù);化工原料及產(chǎn)品、生物儀器試劑(不含?;?品)、儀器儀表、電子產(chǎn)品的購銷;生物技 術(shù)推廣服務(wù);貨物或技術(shù)進(jìn)出口(國家禁止或涉及行政審批的 貨物和技術(shù)進(jìn)出口除外) (依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目, 經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活 動(dòng)) 一般項(xiàng)目:醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;工業(yè)酶制劑研發(fā)(除依法須 能分準(zhǔn)機(jī)項(xiàng)目外的公司。英澤生物深耕行業(yè)多年,始終以客戶的需求為向?qū)?,為客戶提供高質(zhì)量的RNA\DNA試劑盒,外泌體提取試劑盒,逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,熒光定量PCR。英澤生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術(shù)為先導(dǎo),以產(chǎn)品為平臺(tái),以應(yīng)用為重點(diǎn),以服務(wù)為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價(jià)值,提供更優(yōu)服務(wù)。英澤生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康市場,以敏銳的市場洞察力,實(shí)現(xiàn)與客戶的成長共贏。