RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織、簡(jiǎn)單的植物材料、各種微生物、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線(xiàn)。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無(wú)需苯酚氯仿抽提等步驟,簡(jiǎn)單快捷。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成RNA提取試劑注意事項(xiàng):使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。成都正規(guī)RNA提取試劑廠(chǎng)家推薦
與DNA不同,RNA一般為單鏈長(zhǎng)分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu),但是很多RNA也需要通過(guò)堿基配對(duì)原則形成一定的二級(jí)結(jié)構(gòu)乃至三級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)行使生物學(xué)功能。RNA的堿基配對(duì)規(guī)則基本和DNA相同,不過(guò)除了A-U、G-C配對(duì)外,G-U也可以配對(duì)。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類(lèi),即tRNA(轉(zhuǎn)運(yùn)RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場(chǎng)所。蕪湖RNA提取試劑廠(chǎng)家推薦用于各種植物、動(dòng)物、微生物的RNA提取,在每個(gè)試劑盒里都有一份說(shuō)明使用說(shuō)明書(shū)。
RNA提?。褐饕噭㏕rizol是一種新型總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶。1.Trizol試劑含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要來(lái)源是操作過(guò)程中手和空氣中的浮沉,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴(yán)。3.細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會(huì)降低較后得率,因?yàn)橐徊糠諶NA會(huì)殘留在未裂解的細(xì)胞中。細(xì)胞裂解之后要看不見(jiàn)顆粒狀物質(zhì)(結(jié)締組織和骨除外)。在清洗和裂解細(xì)胞時(shí)較好在低溫下操作,防止在操作過(guò)程中釋放的內(nèi)源RNase降解了RNA。4.酵母和一些細(xì)菌由于細(xì)胞壁的特別結(jié)構(gòu),可以加入Trizol試劑同時(shí)加入無(wú)RNase的玻璃珠并劇烈振蕩,使細(xì)胞裂解充分。2-8℃避光保存一年。
科學(xué)家曾經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室里就成功地讓RNA實(shí)現(xiàn)了自我復(fù)制的功能。不僅如此,還有科學(xué)家構(gòu)建了一種DNA-RNA雜交基因組的大腸桿菌。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明,即使有DNA-RNA的雜交鏈的中間態(tài),生物也不至于會(huì)死亡。所以,RNA較早可能給就是生物的遺傳物質(zhì),只是后來(lái)逐步被替代了。當(dāng)然,還有一些次要的原因,比如,我們都知道DNA是在細(xì)胞核當(dāng)中的,完成生命活動(dòng)這些步驟其實(shí)都在細(xì)胞核外進(jìn)行,因此這樣其實(shí)更加安全。而如果是RNA,那就沒(méi)有必要存在細(xì)胞核了,但是當(dāng)細(xì)胞損失時(shí),就很容易出現(xiàn)問(wèn)題。因此,DNA后來(lái)逐漸取代了RNA作為生物的遺傳物質(zhì)。但這并不是說(shuō)RNA不能夠作為遺傳物質(zhì),相反它是可以作為遺傳物質(zhì)而存在的。細(xì)菌總RNA提取試劑盒:提取的總RNA純度高,沒(méi)有DNA和蛋白質(zhì)污染,適用于RT-PCR。
RNA的提?。罕娝苤琓rizol是一種RNA提取試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍和酚等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞和溶解細(xì)胞中的其他成分,壓制細(xì)胞釋放出核酸酶,維持細(xì)胞中RNA的穩(wěn)定性,我們可以在反應(yīng)物中加入Trizol后搖勻,在加入氯仿離心,這樣的話(huà)我們的RNA就進(jìn)入了水相中,再用異丙醇沉淀水相中的RNA,即可達(dá)到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱(chēng)取一定量的預(yù)處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH,攪拌抽提一定時(shí)間后,離心分離上清液,調(diào)節(jié)pH至等電點(diǎn),經(jīng)酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當(dāng)稀釋,調(diào)pH7.0,這樣的話(huà)RNA就出現(xiàn)了,分別測(cè)定吸光值A(chǔ)260和A280并計(jì)算A260/A280,就可以測(cè)定RNA的提取率了。當(dāng)然啦,我們還可以進(jìn)行深入研究,如測(cè)定Nacl的濃度,PH的大小,以及抽提時(shí)間對(duì)RNA提取率的影響啦。植物RNA提取試劑:可從植物組織中快速提取總RNA,可同時(shí)處理大量不同樣品。無(wú)錫正規(guī)RNA提取試劑哪里買(mǎi)
細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):提取的RNA,品質(zhì)高,產(chǎn)量多。成都正規(guī)RNA提取試劑廠(chǎng)家推薦
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無(wú)蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。成都正規(guī)RNA提取試劑廠(chǎng)家推薦