子宮內(nèi)膜異位癥模型造模方法選用非動(dòng)情期大鼠，術(shù)前1 d予戊酸雌二醇0.2 mg/只灌服。手術(shù)在室溫28～32℃環(huán)境下進(jìn)行，無(wú)菌操作。以10%水合氯醛3 mL/kg進(jìn)行腹腔注射麻醉，將麻醉后的大鼠仰臥位固定于手術(shù)板上，腹部備皮，常規(guī)消毒鋪巾。大鼠下腹正中恥骨聯(lián)合上1 cm處以上取長(zhǎng)約2～3 cm縱行切口，進(jìn)腹后在膀胱背側(cè)找到“Y”字型子宮，游離右側(cè)子宮，近端離子宮角1 cm處結(jié)扎，遠(yuǎn)端離卵巢1 cm處結(jié)扎，剪下右側(cè)子宮。將剪下的子宮組織放入盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中，縱向剖開(kāi)。將子宮內(nèi)膜與肌層分離，剪取3塊3 mm×5 mm的內(nèi)膜組織，用4-0號(hào)可吸收線(xiàn)將內(nèi)膜面貼于種植部位，分別縫合在左側(cè)卵巢、宮骶韌帶以及左側(cè)遠(yuǎn)離腹部切口的腹壁上。隨后用慶大霉素稀釋液沖洗腹腔，***用0號(hào)絲線(xiàn)分層縫合腹部切口，常規(guī)關(guān)腹。術(shù)后密切觀(guān)察大鼠呼吸、心率，待其自然蘇醒，正常喂養(yǎng)，觀(guān)察大鼠傷口及生活情況。術(shù)后第1天開(kāi)始每只大鼠肌內(nèi)注射慶大霉素0.1 mL，每天1次，連續(xù)7 d。術(shù)后第10天開(kāi)始每天予戊酸雌二醇0.02 mg/kg灌服,連續(xù)5 d。子宮內(nèi)膜異位癥模型的構(gòu)建需要精確的實(shí)驗(yàn)條件和操作技術(shù)。湖北真實(shí)的子宮內(nèi)膜異位癥模型怎么造模

自體移植的子宮內(nèi)膜異位癥模型可用子宮組織塊移植法和子宮內(nèi)膜移植法:前者將動(dòng)物子宮剪開(kāi)后直接進(jìn)行移植，后者將子宮內(nèi)膜層與肌層分離后，種植內(nèi)膜層。非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物還可將子宮體向腹腔內(nèi)翻轉(zhuǎn)，使經(jīng)血逆流入腹腔形成病灶。目前大部分實(shí)驗(yàn)選擇動(dòng)物的動(dòng)情期(采集陰道分泌物來(lái)確定)進(jìn)行，認(rèn)為此時(shí)形成模型成功率高。但有研究表明，在動(dòng)物非動(dòng)情期進(jìn)行手術(shù)，術(shù)后補(bǔ)充一定量雌性因子，與動(dòng)情期形成子宮內(nèi)膜異位癥模型率差異元明顯性意義。浙江靠譜的子宮內(nèi)膜異位癥模型怎么造模該模型有助于我們?cè)u(píng)估不同改善方法對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥患者的生活質(zhì)量改善程度。

子宮內(nèi)膜異位癥模型的觀(guān)察指標(biāo)驗(yàn)證模型是否成功：大鼠建模28d后再次手術(shù)，腹腔麻醉后固定，腹部備皮，消毒鋪巾，取原切口旁開(kāi)腹，取出3個(gè)不同部位的移植物。記錄移植物大體特點(diǎn)。用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植物的長(zhǎng)度、高度與寬度，按公式計(jì)算體積：體積=0.52×長(zhǎng)×寬×高[4]。用電子天平稱(chēng)取移植物質(zhì)量。將取出的移植物和左側(cè)子宮的在位內(nèi)膜標(biāo)本用10%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，H-E染色，顯微鏡下觀(guān)察組織病理學(xué)變化來(lái)驗(yàn)證模型的成功率。

與正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞相比，子宮異位內(nèi)膜異位癥模型細(xì)胞的自噬相關(guān)基因（MAP1LC3B，也叫LC3B和BECN1，也叫Beclin1）表達(dá)水平明顯下降。通過(guò)將FCGR3- NK細(xì)胞分別與抑制自噬（3-MA-ESC和siATG5-ESC）、促進(jìn)自噬（Rap-ESC）和未處理（Ctrl-ESC）的異位內(nèi)膜細(xì)胞共培養(yǎng)，來(lái)模擬體內(nèi)微環(huán)境，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與未處理的ESCs共培養(yǎng)后FCGR3- NK細(xì)胞比例上升、而且KIR2DL1和KIR3DL1表達(dá)上調(diào)、NCR3, NCR2, IFNG, PRF1和GZMB表達(dá)下調(diào)；而與抑制了自噬的ESCs共培養(yǎng)的NK細(xì)胞這種變化更加強(qiáng)烈，與促進(jìn)自噬的ESCs共培養(yǎng)則會(huì)減弱這些變化（Fig2）。該模型為我們揭示了子宮內(nèi)膜異位癥中細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的異常變化。

子宮內(nèi)膜異位癥自然發(fā)生的前提是有月經(jīng)周期，非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物可用于自發(fā)性模型的建立，其與人類(lèi)疾病的發(fā)生位點(diǎn)相同，且形態(tài)學(xué)與人類(lèi)相應(yīng)部位的相同，以前人們認(rèn)為自發(fā)模型很少在卵巢形成EM，因此與人類(lèi)EM的發(fā)生可能存在差異，但Dick[町等的研究改變了這一理論，證實(shí)卵巢也易發(fā)病。而誘發(fā)性模型(除非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物)不能完全模擬人類(lèi)發(fā)生EM的過(guò)程、環(huán)境。因此，非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物是比較好的模型，但其發(fā)病率低，約25%-35'3毛;周期在10年以上;且來(lái)源、少，所需經(jīng)費(fèi)昂貴。而誘發(fā)性模型成功率為759串-959島，實(shí)驗(yàn)周期為2個(gè)月左右，來(lái)源普遍，價(jià)格較低，適合大樣本研究。該模型為我們提供了一個(gè)研究子宮內(nèi)膜異位癥中神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)失衡的平臺(tái)。小鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外包

研究人員正在利用子宮內(nèi)膜異位癥模型探索新的改善手段。湖北真實(shí)的子宮內(nèi)膜異位癥模型怎么造模

手術(shù)引起的子宮內(nèi)膜異位癥的自體嚙齒動(dòng)物模型的目標(biāo)是模仿在女性的疾病。我們和其他人曾在小鼠或大鼠鏡觀(guān)察到，在婦女疾病5,6子宮內(nèi)膜異位病灶觀(guān)察表明，改變基因的表達(dá)模式。鼠標(biāo)在執(zhí)行手術(shù)的優(yōu)點(diǎn)之一是，大量的轉(zhuǎn)基因小鼠品系可以幫助研究人員確定的具體組成部分子宮內(nèi)膜異位癥的建立和發(fā)展中的重要作用。另一種模式，即切除子宮內(nèi)膜碎片是免疫功能低下小鼠的腹膜也被普遍使用，但受限于缺乏正常的免疫系統(tǒng)被認(rèn)為是在子宮內(nèi)膜異位癥2,7的重要。重要的是，手術(shù)引起的子宮內(nèi)膜異位癥的小鼠模型是一個(gè)通用的模型已被用于研究免疫系統(tǒng)8，9,10和 11,12因子環(huán)境因素如何影響子宮內(nèi)膜異位癥，以及子宮內(nèi)膜異位癥的影響，對(duì)fertility 13和痛苦14。湖北真實(shí)的子宮內(nèi)膜異位癥模型怎么造模