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如何降低檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率?檢驗(yàn)技師。應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。使用校對(duì)過(guò)的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。檢測(cè)試劑盒不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。洗滌干凈。洗板不干凈,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。注意事項(xiàng):為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。焦亞硫酸鈉溶液(100×)
檢測(cè)試劑盒的要點(diǎn)有哪些?在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。一切試劑瓶蓋須蓋緊以避免蒸騰和污染,試劑避免受到微生物的污染,由于蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)過(guò)錯(cuò)的成果。當(dāng)心汲取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)刻和溫度。請(qǐng)注意在汲取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),*個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)刻距離假如太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)刻,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且,洗滌不充分將影響實(shí)驗(yàn)成果。檢測(cè)試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,詳細(xì)以標(biāo)簽上的標(biāo)明為準(zhǔn)。醋酸-醋酸鈉緩沖液液體試劑給藥途徑多,可以內(nèi)服,外用。
殺滅曲線的建立:通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線),確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的較低濃度,從而篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株。建立殺滅曲線至少選擇5個(gè)濃度。1、按照20-25%的細(xì)胞密度將未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2過(guò)夜培養(yǎng)(需要更高密度,可增加接種量)。2、根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,設(shè)定合適的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。3、第2天換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基,每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。4、接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。5、按照每2天進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù),來(lái)確定殺滅未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的恰當(dāng)濃度。通常7-10天內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的較低濃度為篩選用的工作濃度。
溶故配制注意事項(xiàng):1.藥品要有較好的質(zhì)皿試劑分為優(yōu)級(jí)純(保證試劑,Guaranteed reagent,G.R.),分析試劑(Antalytical reagent, A. R.)化學(xué)純(Chemical pure,C. P.)和實(shí)驗(yàn)試劑(Laboratory reagent, L. R.)等等?;瘜W(xué)試劑,雜質(zhì)較多。只在個(gè)別情況下應(yīng)用。如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。2.藥品稱且要精確。3.配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸餾水,比電閉值在50萬(wàn)歐姆以上,PH在5.5-7.0之間才可應(yīng)用,在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此頂要求。配制一般化9k用溶液只要求用雙燕蒸餾水或去離子水.4.配好后的溶液,應(yīng)立即除菌處理(如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)),以防雜菌生長(zhǎng)。檢測(cè)試劑盒是經(jīng)過(guò)酶聯(lián)免疫吸附反響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)特定物質(zhì)的檢測(cè)試劑盒。
試劑盒實(shí)驗(yàn)技巧:濃洗刷液或許會(huì)有結(jié)晶分出,檢測(cè)試劑盒稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗刷時(shí)不影響效果。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,核算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器,并經(jīng)常校正其正確性,以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)目多,舉薦運(yùn)用排加樣。封板膜只限一次性運(yùn)用,以避免交叉污染。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)效果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。pH緩沖溶液有何用途:pH測(cè)量前標(biāo)定校準(zhǔn)pH計(jì)。氯化銨溶液(50mmol/L)
早期的化學(xué)試劑只是指“化學(xué)分析和化學(xué)試驗(yàn)中為測(cè)定物質(zhì)的組分或組成而使用的純粹化學(xué)藥品”。焦亞硫酸鈉溶液(100×)
單個(gè)核細(xì)胞分離步驟:Ficoll試劑混勻:首先將Ficoll試劑瓶顛倒多次混勻,使用注射器法吸取Ficoll分離液(去掉聚丙烯蓋,插入注射器針頭)或吸管法吸取Ficoll分離液(去掉聚丙烯蓋,拉起鋁環(huán),拉開(kāi)金屬密封,移除銀環(huán)。拿掉橡膠密封,無(wú)菌操作吸取需要的Ficoll分離液)。1.離心管加入3mLFicoll分離液。2.稀釋過(guò)的血液樣本小心鋪到Ficoll分離液上面。注:緩慢加入樣本,小心不要和Ficoll分離液混合,勿攪動(dòng)。1.室溫條件,水平轉(zhuǎn)子離心400g,離心30-40min,可見(jiàn)細(xì)胞分層。2.用無(wú)菌吸管吸掉上層血漿和血小板,不要碰到單個(gè)核細(xì)胞層。3.無(wú)菌吸管轉(zhuǎn)移單個(gè)核細(xì)胞層到無(wú)菌離心管。焦亞硫酸鈉溶液(100×)