嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間。反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)，酶失活；反應(yīng)時(shí)間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。注意檢測(cè)試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。評(píng)估試劑的實(shí)用性。試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間。顯色時(shí)間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時(shí)間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報(bào)陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。檢測(cè)試劑盒中會(huì)有不同濃度的規(guī)范樣品。肝素鈉溶液(0.1%,125U/ml,無菌)

檢測(cè)檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)：檢測(cè)檢測(cè)試劑盒保存在2-8℃，運(yùn)用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗刷液會(huì)有結(jié)晶，這歸于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶徹底溶解后再運(yùn)用。試驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。嚴(yán)厲按照闡明書中標(biāo)明的時(shí)刻、加液量及次序進(jìn)行溫育操作。所有液體組分運(yùn)用前充分搖勻。檢測(cè)檢測(cè)試劑盒搜集：標(biāo)本搜集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，若不能馬上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)防止反復(fù)凍融。三羥甲基氨基甲烷緩沖液（pH8.1）檢測(cè)試劑盒在生產(chǎn)過程中，不同批次的試劑的質(zhì)量是確保完全一致非常困難。

試劑盒在生產(chǎn)過程中的辦法：質(zhì)量確保是一個(gè)雜亂的過程，許多重要的環(huán)節(jié)都會(huì)影響檢測(cè)質(zhì)量。在生產(chǎn)過程中，不同批次的試劑的質(zhì)量是確保完全一致非常困難，檢測(cè)試劑盒甚至經(jīng)過批檢驗(yàn)項(xiàng)目和成果也不同，因此有必要挑選和訂貨試劑長(zhǎng)批次，并小鼠檢測(cè)試劑盒確保保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行本規(guī)范能夠防止因試劑批號(hào)變化與質(zhì)量控制系統(tǒng)和雜亂的過程，從頭評(píng)價(jià)試劑從頭建立，并能確保成果的穩(wěn)定性；有效期短，運(yùn)用率低的試劑，應(yīng)小包裝，包裝，可每次都是采納，以防止重復(fù)凍融損壞試劑引起的。

如何正確保存和使用pH緩沖溶液：緩沖溶液配制后，應(yīng)裝在玻璃瓶或聚乙烯瓶中（堿性pH緩沖液，如，pH=9.18、pH=10.01、pH=12.46等，應(yīng)裝在聚乙烯瓶中）瓶蓋嚴(yán)密蓋緊，在冰箱中低溫(5～10℃)保存，一般可使用六個(gè)月左右，如發(fā)現(xiàn)有混頻器濁，發(fā)霉或沉淀現(xiàn)象，不能繼續(xù)使用。使用時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)備幾個(gè)50mL的聚乙烯小瓶，將大瓶中的組沖溶液倒入小瓶中，并在環(huán)境溫度下放置1～2個(gè)小時(shí)，等溫度平衡后再使用。使用后不得再倒入大瓶中，以免污染，瓶中的緩沖溶液在＞10℃的環(huán)境條件下可以使用2～3天，一般pH=7.00、pH=6.86、pH=14.00三種溶液使用時(shí)間可以長(zhǎng)一些，pH=9.18和pH=10.01溶液由于吸收空氣中的二氧化碳，其pH值比較容易變化。檢測(cè)試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。

檢測(cè)檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)：檢測(cè)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排加樣。 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。PH電極的保護(hù)液，即 3mol/L的KCL溶液。魯哥氏染色液(Lugol's碘液,5%,無菌)

在試管里進(jìn)行某些實(shí)驗(yàn)時(shí)，取試劑不需要準(zhǔn)確用量，只要學(xué)會(huì)估計(jì)取用液體的量即可。肝素鈉溶液(0.1%,125U/ml,無菌)

DC細(xì)胞誘導(dǎo)：1) 將收集的PBMC在1640培養(yǎng)基，在37 ℃、5 % CO2條件下在培養(yǎng)板培養(yǎng)4h。2) 輕輕吸取上清，收集貼壁細(xì)胞，加入含15%血清，100ng/ml rhGM-CSF、100ng/ml rhIL-4的1640培養(yǎng)基，培養(yǎng)5～7d獲得未成熟DC，用25ng/ml hTNF-α刺激2～3天，獲得成熟DC。3) 用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，至細(xì)胞毛刺樣突起，有典型DC形態(tài)懸浮細(xì)胞。注意事項(xiàng)：細(xì)胞較好在細(xì)胞貼壁注：分離后細(xì)胞較好在貼壁后當(dāng)天換液（貼壁細(xì)胞貼壁能力很弱，潤(rùn)洗時(shí)輕柔），過夜后部分細(xì)胞漂浮，細(xì)胞得率減少。肝素鈉溶液(0.1%,125U/ml,無菌)