植物外泌體提取方法參考

來源：發(fā)布時(shí)間：2023-12-27

from clipboard 近期，植物來源的外泌體狀納米顆粒（Plant-derived exosome-like nanoparticles，PENs）逐漸成為研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。小編在給客戶提供服務(wù)的過程中也收到很多這方面的咨詢，今天就將這些信息及如何收獲PENs做下簡單的整理，希望對大家有那么點(diǎn)點(diǎn)幫助。

一方面PENs是自然產(chǎn)生的，攜帶來自其母細(xì)胞的無害成分，并且其中一些已被證明具有治療作用；另一方面，更多研究者們也聚焦其作為哺乳動物細(xì)胞來源外泌體（Mammalian cell-derived exosomes，MDEs)替代品，以規(guī)避MEDs技術(shù)的局限性，尤其是在靶向遞送系統(tǒng)方面。

PENs的比較大優(yōu)勢在于樣本容易取得，適合于大規(guī)模生產(chǎn)。此外，PENs的生理、化學(xué)和生物學(xué)特性決定了其高穩(wěn)定性，可以在體內(nèi)的某些組織中積累并長期在外周血中循環(huán)，結(jié)合其低毒性、低免疫原性、高細(xì)胞攝取率的等優(yōu)點(diǎn)，因此在疾病治療以及作為納米載體的應(yīng)用開發(fā)中具有巨大的潛力。

PENs和MDEs之間有許多相似之處，但兩者仍存在較多差異。MDEs的脂質(zhì)雙層主要由膽固醇、糖苷脂、神經(jīng)酰胺和磷脂酰絲氨酸組成，它們具有穩(wěn)定性和獨(dú)特的剛度。相比之下，PENs的外泌體膜富含磷脂酸（PA）、磷脂酰膽堿（PC）、糖基二?；视停―GDG）和單半乳糖基二?；视停∕GDG）,這些獨(dú)特之處使其具有細(xì)胞調(diào)節(jié)活性，并可以在不同物種間的交流發(fā)揮更大作用[1]。常規(guī)的PENs樣本的制備結(jié)果同樣需要經(jīng)過透射電鏡、NTA檢測等質(zhì)控項(xiàng)目，這也對其前處理及提取提出了較高要求。

對于葡萄、生姜、蘋果等富含汁液的樣本，我們可以通過以下方式進(jìn)行前處理：

from clipboard

圖片來源：Asian J Pharm Sci.DOI 10.3389/fpls.2022.1064412

1、取得新鮮樣本后，根據(jù)樣本不同采取多次清洗或去皮步驟。

2、利用高速攪拌器（勻漿器）將樣本磨碎，過程避免溫度過高。

3、將取得的果汁或液體經(jīng)過1000g 10min、3000g 20min、10000g 60min多次離心，每次取上清，以去除雜質(zhì)及大顆粒。

4、利用0.45um的過濾器過濾掉液體上清中的雜質(zhì)，之后便可進(jìn)行下一步的提取流程。

注：對于茶葉等汁水含量較低的樣本，則需要在清洗后在一定體積中的冷PBS緩沖液當(dāng)中行勻漿，之后再進(jìn)行過濾操作。

作為外泌體提取的常見方法之一，沉淀法也十分適合PENs的提取。無論是單獨(dú)使用沉淀法還是沉淀法和超離法組合使用都能滿足較大規(guī)模PENs的提取要求。與其他方法相比，沉淀法在具有高得率的同時(shí)還可以最大程度保留PENs的活性并保持其形態(tài)，且由于其操作簡單耗時(shí)短，非常適合PENs的規(guī)?；苽?[2]。

from clipboard