復(fù)制型病毒風(fēng)險(xiǎn)是評(píng)估病毒載體安全性的關(guān)鍵因素。評(píng)估分析基因突變和內(nèi)源性   病毒片段重組產(chǎn)生復(fù)制型病毒的可能性，可有效避免出現(xiàn)與之相關(guān)的不良反應(yīng)事件。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)了針對(duì)不同復(fù)制缺陷型病毒載體的復(fù)制型病毒檢測(cè)試劑盒（qPCR法/RT-PCR法），可用于測(cè)試載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)、生產(chǎn)終末細(xì)胞、收獲的病毒上清和經(jīng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)后的細(xì)胞產(chǎn)品等，產(chǎn)品性能可靠、靈敏度高、操作便捷快速。歡迎您聯(lián)系正揚(yáng)南京正揚(yáng)的重組腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒性能如何？杭州PCR法病毒檢測(cè)常見問題

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①軟件參數(shù)設(shè)置不當(dāng)可能引起標(biāo)曲參數(shù)或檢測(cè)結(jié)果異常。如擴(kuò)增曲線信號(hào)蕞早出現(xiàn)在14個(gè)循環(huán)左右，基線卻設(shè)置為3-15，導(dǎo)致儀器將14個(gè)循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號(hào)默認(rèn)為基線部分，出現(xiàn)結(jié)果異常。建議將BaselineEnd設(shè)置為擴(kuò)增信號(hào)出現(xiàn)的前一個(gè)循環(huán)，或由軟件自動(dòng)設(shè)置。②擴(kuò)增曲線飄起：該現(xiàn)象通常出現(xiàn)于高濃度模板情況下，擴(kuò)增曲線Ct值在10以內(nèi)的樣品。針對(duì)此類樣品檢測(cè)，設(shè)置標(biāo)曲時(shí)建議盡量控制標(biāo)曲蕞高濃度Ct值控制在10以上。檢測(cè)樣品時(shí)建議對(duì)樣品進(jìn)行稀釋后再測(cè)試。寧波RCR病毒檢測(cè)常見問題為什么要做復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)？

《中國(guó)藥典》2020版三部《人用基因醫(yī)治制品總論》以及CDE發(fā)布的細(xì)胞基因醫(yī)治相關(guān)的技術(shù)指導(dǎo)原則中均提到，在設(shè)計(jì)為復(fù)制缺陷型或條件復(fù)制型載體的情況下，應(yīng)分析是否存在殘留的復(fù)制型或野生型載體及其水平。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制性腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒，可同時(shí)分別精確測(cè)定樣品中高濃度的目標(biāo)載體和低濃度的復(fù)制型載體濃度，從而有效地提高了方法靈敏度，滿足法規(guī)要求的無復(fù)制型腺相關(guān)病毒（rcAAV）的污染，可用于GMP生產(chǎn)的rAAV質(zhì)量控制。

《CAR-T細(xì)胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測(cè)方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法(PERT)等。其中，利用指示細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)生產(chǎn)過程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細(xì)胞）存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)是FDA推薦的RCL檢測(cè)方法。

《CAR-T細(xì)胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測(cè)方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法(PERT)等。其中，利用指示細(xì)胞培養(yǎng)法對(duì)生產(chǎn)過程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細(xì)胞）存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點(diǎn)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)是FDA推薦的RCL檢測(cè)方法。 南京正揚(yáng)有復(fù)制型慢病毒檢測(cè)試劑盒性能如何？

復(fù)制性慢病毒/復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)的必要性：RCL/RCR會(huì)同逆轉(zhuǎn)錄病毒載體一樣，整合在細(xì)胞基因組中，從而產(chǎn)生因整合導(dǎo)致的原ai基因激  活，抑ai基因破壞或者使促細(xì)胞生長(zhǎng)的因子高度表達(dá)而造成二次仲瘤的風(fēng)險(xiǎn)。因其具有復(fù)制性，即產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒，增加了因整合而造成的二次仲瘤的風(fēng)險(xiǎn)。雖然目前在病毒制備體系方面改進(jìn)很多，很大程度上降低了RCL/RCR產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)，但是仍不能完全排除，美國(guó)FDA要求對(duì)于γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和慢病毒載體，需要在整個(gè)生產(chǎn)過程及不同階段進(jìn)行RCL/RCR檢測(cè)，需要對(duì)載體生產(chǎn)用主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)、生產(chǎn)終末細(xì)胞、載體上清液及在體外培養(yǎng)超過4天的載體轉(zhuǎn)到細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，為什么要做復(fù)制型病毒檢測(cè)？南京RT-PCR法病毒檢測(cè)服務(wù)

復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)。杭州PCR法病毒檢測(cè)常見問題

RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)：鑒于RCL的潛在威脅，從慢病毒載體生產(chǎn)工藝的各個(gè)環(huán)節(jié)：主細(xì)胞庫(kù)(MCB)、工作細(xì)胞庫(kù)(WCB)、終末端細(xì)胞(EOPC)、慢病毒收獲液(UPB)、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞甚至CAR-T治  療病人的臨床樣本都需要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)來核實(shí)是否存在RCL，從而可以大限度地避免病人因CAR-T治   療發(fā)生二次腫   瘤。復(fù)制型慢病毒RCL的指示細(xì)胞培養(yǎng)法檢測(cè)需28天，耗時(shí)較長(zhǎng)；而基于VSV-G序列的Q-PCR方法和基于gag序列的PCR方法具有檢測(cè)時(shí)間短、靈敏度高、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。目前，許多CAR-T申報(bào)企業(yè)采用Q-PCR/PCR方法直接測(cè)定終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，作為快速放行方法。杭州PCR法病毒檢測(cè)常見問題