為了正確使用外泌體作為DDS，我們必須考慮外泌體的成分和它們的形成途徑。然后，還應(yīng)描述外泌體親和力和細(xì)胞攝取的特征。外泌體載體表現(xiàn)出不同的目的和功能，這要?dú)w功于外泌體作為基本的轉(zhuǎn)運(yùn)體本身就具有出色的特性。這可以用于細(xì)胞靶向，也可以作為藥物的額外增強(qiáng)。迄今為止，ExoCarta在外泌體中發(fā)現(xiàn)了大約10,000種蛋白質(zhì)、3500種mRNA和超過1100種不同的脂質(zhì)。對于系統(tǒng)審查，出現(xiàn)了許多很棒的數(shù)據(jù)庫，例如Vesiclepedia和ExoCarta，其中描述了外泌體分離程序和來源以及已識別的載體。外泌體的分離方法可能還存在一定的局限性和偏差。合肥外泌體分離報價表

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：外泌體保護(hù)miRNA免于降解，使它們比游離miRNA更穩(wěn)定，并能被特定受體細(xì)胞有效整合。因此，在外泌體攜帶的貨物中，miRNA可以提供有關(guān)它們來源的細(xì)胞類型、靶標(biāo)和細(xì)胞狀態(tài)的身份信息。越來越多的證據(jù)表明，疙瘩細(xì)胞來源的外泌體已成為通過傳遞病miRNA促進(jìn)疙瘩細(xì)胞增殖、侵襲、血管生成、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和疙瘩微環(huán)境重塑的主要候選者。血管生成對于惡性疙瘩的生長和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要，因為新血管可以提供額外的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，還可以清理廢物。比如：病細(xì)胞釋放外泌體exo-miR-21、exo-miR-23；外-miR-29；exo-miR-103和exo-miR-210可以促進(jìn)增殖、血管生成和疙瘩轉(zhuǎn)移。北京外泌體分離RT-qPCR外泌體通過調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)和疙瘩微環(huán)境，在疙瘩免疫治著中的作用日益受到關(guān)注。

外泌體衍生物miRNA的重要應(yīng)用：miRNA是一類主要的小分子、單鏈、非編碼RNA分子，其成熟形式的長度在20到22個核苷酸(NT)之間，在幾乎所有生物途徑中發(fā)揮重要作用，包括細(xì)胞生長、增殖、分化、免疫反應(yīng)，細(xì)胞凋亡，代謝和疙瘩發(fā)生。外泌體在體液中的主要作用是可以保護(hù)miRNA，防止其生物分子在非生理條件下（多次凍融循環(huán)、長期儲存和極端pH）降解。據(jù)報道，外泌體來源的miRNA在-20°C下可保持穩(wěn)定長達(dá)5年，并且對凍融循環(huán)具有抵抗力.這也使外泌體成為病癥和其他疾病的潛在生物標(biāo)志物。miRNA與包括病癥在內(nèi)的許多疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，并且還被證明被遠(yuǎn)端或附近的受體細(xì)胞吸收作為外泌體中的貨物，作為細(xì)胞間通訊的一種方法，可能會影響發(fā)病機(jī)制。所以，外泌體可以被看作是miRNA轉(zhuǎn)移至目標(biāo)受體細(xì)胞的載體。

外泌體分離方法之過濾法：超濾膜也可用于外泌體的分離。根據(jù)微泡的大小，使用超濾膜過濾的方法可以將外泌體與蛋白質(zhì)和其他大分子分離。外泌體也可以通過多孔結(jié)構(gòu)捕獲它們來分離。常見的過濾膜孔徑為0.8m、0.45m或0.22m，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體。比如微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)一般用于分離40-100nm外泌體。在初始步驟中，去除較大的囊泡。在接下來的步驟中，外泌體會群集中在過濾膜上。隔離步驟相對較短，但該方法需要用PBS緩沖液對硅結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)孵育。除標(biāo)準(zhǔn)過濾技術(shù)外，切向流過濾在有效分離外泌體方面也有著嘗試應(yīng)用，通過切向流過濾技術(shù)去除游離肽和其他小化合物從而分離具有確定大小的外泌體。此外，在體外研究和脂肪組織中，也會采用超濾與SEC的結(jié)合的方式來分離外泌體。通過(a)對片上過濾器施加壓力或(b)產(chǎn)生電場，迫使外泌體穿過多孔膜，結(jié)合錯流和電泳分選來完成篩分。分離過程中避免對外泌體結(jié)構(gòu)和功能造成影響至關(guān)重要。

分離外泌體的方法之密度梯度超速離心：有助于根據(jù)尺寸、結(jié)構(gòu)和形態(tài)差異分離和分析納米級材料。DGUC“細(xì)化”分離的囊泡，并使用密度為1.07g/mL或更低的密度梯度培養(yǎng)基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌體分離的常見梯度培養(yǎng)基。有市售的碘沙醇密度梯度分餾膜，用于將外泌體與非囊泡成分分離。將生物懸浮液添加到梯度培養(yǎng)基中，并以完整的梯度分層組分。DGUC有助于分離具有相同梯度的樣品。凋亡小體、蛋白質(zhì)聚集體和其他非外泌體微囊泡可能通過超速離心干擾較終分離的外泌體產(chǎn)物。DGUC有助于克服超速離心的局限性，并提供較純凈的外泌體。DGUC在精細(xì)化和高性能外泌體分離方法中的應(yīng)用。簡而言之，在分離細(xì)胞碎片后，應(yīng)用1×105g用60%碘沙醇離心3小時，然后用1×10離心5用40%碘沙醇g18小時有助于形成多達(dá)12個碘沙醇梯度級分和兩個外泌體級分。超速離心使用連續(xù)的密度梯度或逐步梯度來較小化這些顆粒材料對外泌體的干擾。外泌體分離是外泌體研究中的重要步驟。合肥外泌體分離報價表

外泌體在很多生理和病理情況下都發(fā)揮著不可或缺的作用。合肥外泌體分離報價表

差速離心法分離外泌體的實驗原理：外泌體是一種小的(40-100nm)細(xì)胞外膜囊泡，目前進(jìn)行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細(xì)胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細(xì)胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機(jī)制各不相同具體取決于細(xì)胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通?？梢员鎰e出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細(xì)胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時稱為“微泡”，是由質(zhì)膜起泡產(chǎn)生的，一般的粒徑尺寸范圍為(50–1000nm)。合肥外泌體分離報價表