外泌體蛋白質(zhì)特征是:膜結(jié)合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常規(guī)用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認的蛋白質(zhì)是受體（CD46和CD55）、熱休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、參與外泌體形成的蛋白質(zhì)（Alix、TSG101）和負責(zé)融合和轉(zhuǎn)運的膜蛋白（GTP酶、膜聯(lián)蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標(biāo)記蛋白可以用于確認外泌體的存在。也有相關(guān)研究稱外泌體含有其他顆粒，如膽固醇（B淋巴細胞來源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神經(jīng)酰胺等。外泌體還運輸形態(tài)發(fā)生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），參與黑腹果蠅所描述的組織模式發(fā)育。外泌體介導(dǎo)的RNA轉(zhuǎn)移對基因表達水平和遺傳數(shù)據(jù)傳遞具有重要的調(diào)節(jié)作用。深圳外泌體分離RNA提取

使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉(zhuǎn)子的選擇?！皵[動桶”(SW)轉(zhuǎn)子和“定角”(FA)轉(zhuǎn)子，這些轉(zhuǎn)子的幾何形狀根本不同，因此沉降特性也不同。這些轉(zhuǎn)子之間的主要區(qū)別在于：FA轉(zhuǎn)子，與旋轉(zhuǎn)半徑相比，沉積顆粒的較大路徑長度通常較小，允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而，第二個區(qū)別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的，不同粒子的路徑長度根據(jù)軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度，外面顆?？赡艹两档酶欤枰鶕?jù)不同的實驗需要進行選擇。天津組織提取外泌體制造商外泌體富集、分離和檢測是當(dāng)前外泌體研究的熱點之一。

生物試劑Tetraspanins是常見的外泌體標(biāo)志物。它們包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins參與外泌體的產(chǎn)生。在抗原呈遞細胞中，MHC-II分子的功能通過它們整合到富含四跨膜蛋白CD9的細胞質(zhì)膜區(qū)域中來調(diào)節(jié)。CD63外泌體蛋白被認為是病癥的蛋白質(zhì)標(biāo)志物。此外，四跨膜蛋白家族的另一成員CD81在丙型肝炎的細胞進入中起重要作用。慢型丙型肝炎患者血清中的外泌體CD81會升高，表明CD81可能是丙型肝炎染上的標(biāo)志物。膠質(zhì)母細胞瘤表皮生長因子受體vIII(EGFRvIII)被認為是膠質(zhì)母細胞瘤的標(biāo)志物。關(guān)于中樞的神經(jīng)系統(tǒng)，在腦疙瘩者血清中分離的外泌體中也檢測到了EGFR、EGFRvIII和TGFβ。

在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細胞外囊泡包括來自內(nèi)體，多泡體的細胞外泌體（30nm至150nm）和來自質(zhì)膜的微泡（150nm至1000nm）。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法除了使用高速離心機的離心分離法以外，還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。#外泌體干細胞#這些細胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染，如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白，均會對獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外，分離方法也會影響細胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要從培養(yǎng)基中分離外泌體，就要使用無血清培養(yǎng)基或無外泌體胎牛血清。外泌體與肺的關(guān)系密切，通過氣道和肺泡微環(huán)境的打開和修飾，參與肺疾病如肺結(jié)核、肺病等的發(fā)生和發(fā)展。

分離外泌體的方法之靜水過濾透析：它主要有助于將整個EV從高度稀釋的溶液中分離出來，而無需超速離心過程。280Musante等人展示了用于從尿液樣本中分離EV的HFD方案。在HFD的初始步驟中，用2000×g離心樣品以去除細胞，細菌和碎片作為沉淀。然后，將上清液保存在透析膜（1000kPa）中，1000kPa或更小的顆粒相應(yīng)地以靜水壓差通過膜。較后，通過離心將外泌體囊泡沉降40,000×g。在HFD分離過程中，外泌體級分在早期階段恢復(fù)，與多步離心相比，這被認為是一個優(yōu)勢。與超速離心相比，HFD也被認為是一種有效的方法?？蓪⒉煌蛛x方法結(jié)合使用，以提高外泌體分離的效率和分離精度。肺泡外泌體分離RT-qPCR

外泌體可通過血液或其他體液傳播，從而在遠離原發(fā)灶的部位誘導(dǎo)細胞生長和轉(zhuǎn)移。深圳外泌體分離RNA提取

外泌體的物理表征方法：常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法，例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡；動態(tài)光散射；納米粒子跟蹤分析；可調(diào)電阻脈沖傳感；和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括：實時定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)（基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測序（next-generationsequencing）、exome-targetedsequencing（下一代測序）、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。深圳外泌體分離RNA提取

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