外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據尺寸而非分子量分離大分子。該技術應用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個孔和隧道。分子根據它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應用不同的洗脫溶液。與離心機離心方法相比，色譜分離具有較多的優(yōu)勢，因為通過色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結構改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術。此外，SEC方法與超濾相結合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場-流分餾結合紫外分析儀和光散射檢測器已被應用于分析外泌體的大小和純度。流場-流分餾結合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質譜檢測。外泌體富集、分離和檢測是當前外泌體研究的熱點之一。鄭州血液外泌體價格

分離外泌體的方法之超濾：它使用孔徑為50-450nm的膜過濾器從細胞碎片和較大的EV中分離外泌體。通過使用納米尺寸的濾膜，可以分離出目標尺寸的外泌體。超濾法通常用作超速離心的后續(xù)步驟，以及凝膠過濾和色譜的較后一步。超濾可以通過切向流過濾（TFF）或直流過濾（DFF）方法進行處理。DFF方法也稱為死端過濾，存在膜污染和顆粒分離受損的問題。此外，DFF只適用于小體積樣品，例如高達30mL的樣品。TFF也稱為錯流過濾是一種更快速、高效和方便的分離大規(guī)模外泌體體積的過程，TFF是樣品流體切向流過濾膜并避免形成濾餅或堵塞的過程。天津肺泡外泌體分離價格外泌體膜表面富含糖基化蛋白和糖基化脂質，這種糖基化在外泌體相互作用和定位中具有重要作用。

分離外泌體的方法之超速離心：離心是一種利用不同的離心力根據顆粒成分的密度、大小和形狀沉淀顆粒成分的過程。超速離心是一種離心過程，較多使用6×106g離心力，有助于隔離更小的組件，例如，核糖體、蛋白質、病毒、外泌體和其他EV。加速度（g）、旋轉半徑、樣品粘度和沉降路徑長度是有效分離外泌體的決定因素。20至250nm之間的粒徑分數可以通過超速離心分離，隨后的離心或尺寸排阻過程產生所需的外泌體。超速離心法被認為是外泌體分離的金標準方法，外泌體需要1×105至2×105g離心1小時。在順序離心過程中，MVs、凋亡小體、細胞碎片、細胞和其他具有較高浮力密度的顆粒在外泌體之前沉淀。然而，必須注意的是，由于密度和大小重疊，大多數當前方法只能富集小EV（即外泌體）。

對于外泌體的標記和鑒定，獲得外泌體之后，如何對其進行鑒定又是一個困擾研究者的問題。國際細胞外囊泡學會(ISEV)在2014年提議，對于分離獲得的外泌體需要從三個層面進行鑒定：WB檢測外泌體標志蛋白表達情況：外泌體膜上富含參與外泌體運輸的跨膜蛋白家族(CD63/CD81/CD9)、熱休克蛋白家族(HSP60/HSP70/HSPA5/CCT2/HSP90)和一些細胞特異性蛋白。其中CD63/TSG101是較常用到的外泌體標志物。TEM鑒定外泌體形態(tài)：電鏡具有較高的分辨率，可以直接觀察到樣品中外泌體的形態(tài)。NTA檢測外泌體粒徑及濃度：TEM可以觀察外泌體的形態(tài)學特征，但無法體現樣本中所有外泌體的粒徑分布情況及整體濃度。NTA(NanoparticleTrackingAnalysis)技術可快速準確地分析外泌體的粒徑分布及濃度，為外泌體鑒定提供有力證據。外泌體分離和分析的標準化和規(guī)范化將有助于外泌體研究領域的進一步發(fā)展。

外泌體通常被認為是細胞間信號分子，包含許多蛋白質、核酸、細胞因子、轉錄因子和其他細胞來源的顆粒。外泌體不只可以向局部環(huán)境傳遞信息，還可以向距離很遠的細胞和組織傳遞信息。這可能作為一般信號和通信通路，但也可能參與致病基因擴散和惡性疙瘩進一步惡化。迄今為止，已證實外泌體存在于體液中，例如羊水、血清、母乳、附睪液、唾液、尿液、腹水和胸腔積液、支氣管肺泡灌洗液、滑液和體外細胞培養(yǎng)上清液中。細胞排出的外泌體也可作為去除不必要的蛋白質和核酸的一種方式，例如，在細胞成熟（網織紅細胞）或排泄系統(tǒng)（腎的內臟和小管）期間的外泌體。外泌體被發(fā)現在各種生物體中，包括哺乳動物、植物和微生物。鄭州血液外泌體價格

外泌體與胚胎學密切相關，參與人類胚胎發(fā)育和胚胎起始過程中的各種調節(jié)作用。鄭州血液外泌體價格

外泌體的構成：外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等發(fā)現鼠的肥大細胞分泌的exosome可以被人的肥大細胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質，不只是mRNA，exosomes所轉移的microRNA同樣具有生物活性，在進入靶細胞后可以靶向調節(jié)細胞中mRNA的水平。這一發(fā)現使得研究人員對exosome的研究熱情激增，截止已經通過286項研究發(fā)現了41860種蛋白質、2838種microRNA、3408種mRNA。一類外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現于早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現于晚期的核內體?，F有大量的研究發(fā)現外泌體中含有40種RAB蛋白。鄭州血液外泌體價格

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