外泌體分離方法之尺寸排阻色譜分離法：尺寸排阻色譜(SEC)用于根據(jù)尺寸而非分子量分離大分子。該技術(shù)應(yīng)用了一種填充有多孔聚合物珠子的柱子，該珠子含有多個(gè)孔和隧道。分子根據(jù)它們的直徑穿過珠子。小半徑分子通過色譜柱的孔遷移需要更長的時(shí)間，而大分子從色譜柱中洗脫得較早。尺寸排阻色譜可以精確分離大分子和小分子。此外，該方法可以應(yīng)用不同的洗脫溶液。與離心機(jī)離心方法相比，色譜分離具有較多的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橥ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響，避免了因剪切力所造成的囊泡結(jié)構(gòu)改變。目前，SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中存在的外泌體的技術(shù)。此外，SEC方法與超濾相結(jié)合已用于分離和分析尿源性外泌體。此外，流場(chǎng)-流分餾結(jié)合紫外分析儀和光散射檢測(cè)器已被應(yīng)用于分析外泌體的大小和純度。流場(chǎng)-流分餾結(jié)合拋物線和交叉流來分離外泌體。獲得的外泌體已通過電子顯微鏡和質(zhì)譜檢測(cè)。分離前的細(xì)胞培養(yǎng)和收集條件也能對(duì)外泌體分離結(jié)果產(chǎn)生重要影響。重慶組織提取外泌體分離報(bào)價(jià)

外泌體分離方法之免疫學(xué)分離方法：免疫學(xué)分離法是利用受位于外泌體膜中的選定蛋白質(zhì)標(biāo)記物影響的抗體對(duì)外泌體進(jìn)行標(biāo)記。這些標(biāo)記的外泌體可以進(jìn)一步輕松處理和純化，例如，使用微芯片或磁珠。磁分離后，外泌體被純化，磁珠被溶解和去除。通過這種簡單快速的方法，就可以獲得較高純度提取物，但不會(huì)分離出缺乏磁性標(biāo)記抗體識(shí)別的表面標(biāo)記的外泌體，這可能導(dǎo)致外泌體池表現(xiàn)效果不佳。這種方法雖然既省時(shí)又直接，輸出純度較高，但也需要較為昂貴的試劑。重慶組織提取外泌體分離報(bào)價(jià)現(xiàn)有的外泌體分離方法可能存在樣品丟失和樣品污染的問題。

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征：CHO細(xì)胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測(cè)和表征分離的囊泡，這些分析包括動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測(cè)量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。根據(jù)制造商的指南，使用TEI總外泌體分離試劑盒（Invitrogen）從培養(yǎng)基中分離外泌體。將細(xì)胞培養(yǎng)基以2000×g離心30分鐘以去除細(xì)胞和任何碎片；隨后將上清液小心移至離心管管中，加入0.5倍體積的TEI試劑，充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時(shí)，然后在棄去上清液后，將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲(chǔ)存在-20°C下，直到需要進(jìn)行后續(xù)分析。

外泌體的構(gòu)成：外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年，Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細(xì)胞分泌的exosome可以被人的肥大細(xì)胞捕獲，并且其攜帶的mRNA成分可以進(jìn)入細(xì)胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì)，不只是mRNA，exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性，在進(jìn)入靶細(xì)胞后可以靶向調(diào)節(jié)細(xì)胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對(duì)exosome的研究熱情激增，截止已經(jīng)通過286項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。一類外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。外泌體受到多種因素的調(diào)控，例如細(xì)胞膜電位、氧化應(yīng)激和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：離心管內(nèi)粒子的速度，由三種力（離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力）的平衡決定，如：其中g(shù)eff為離心力（加速度），R為旋轉(zhuǎn)半徑，即粒子距旋轉(zhuǎn)軸的距離，ω為旋轉(zhuǎn)角頻率，d為粒子直徑，ρ為質(zhì)量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質(zhì)的密度和粘度。在固定的離心條件（轉(zhuǎn)速和介質(zhì)成分）下，粒子速度完全由粒子的形態(tài)和密度決定。密度高于介質(zhì)密度的粒子沿離心力“向下”運(yùn)動(dòng)，而比介質(zhì)輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對(duì)于相似的密度，較大的粒子遷移得更快。因此，在生物學(xué)中，離心主要用于按大小（差速和速率區(qū)帶離心）或按密度（等密度離心）分離不同的物體。在這項(xiàng)研究中，我們專注于使用差速離心按大小進(jìn)行顆粒分級(jí)。外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系復(fù)雜，通過在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移，參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機(jī)制的形成。鄭州血液外泌體分離公司

外泌體可通過血液或其他體液傳播，從而在遠(yuǎn)離原發(fā)灶的部位誘導(dǎo)細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。重慶組織提取外泌體分離報(bào)價(jià)

分離外泌體的方法之超濾：樣品通過0.2μm聚醚砜（PES）膜過濾，較大的顆粒物質(zhì)（如細(xì)胞碎片和凋亡體）被滯留出來。然后，包括外泌體在內(nèi)的半處理濾液樣品通過TFF系統(tǒng)通過500kDa截止濾芯進(jìn)行超濾過程，進(jìn)料流速為120mL/min，跨膜壓力<3.5psi跨膜壓力>10:1，外泌體太大而無法通過毛孔并保持保留。相反，包括游離蛋白在內(nèi)的小分子通過中空纖維孔并作為滲透物洗脫并較終從過程中丟棄。為了獲得高質(zhì)量的外泌體分離和純化，通過TFF連續(xù)重新濃縮截留物樣品，并去除小于500kDa的污染物。較后，將純化的外泌體重懸并儲(chǔ)存在-80°C的聚對(duì)苯二甲酸乙二醇（PETG）瓶中的0.1M蔗糖中，并用于所需的分析。通常，通過結(jié)合超濾加超速離心或離心加超濾等不同分離方法可以成功分離外泌體，使用較低孔徑的膜過濾和超速離心可提供純外泌體。重慶組織提取外泌體分離報(bào)價(jià)

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