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microRNA提取方法及步驟:動物組織(例如鼠肝腦)a.新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊,根據(jù)處理組織的質量,按照50-100mg加入1ml的比例加入Lysis/Bindingbuffer后電動或者手動徹底勻漿。或者在液氮中研磨組織成細粉后,取適量組織細粉(約50-100mg)轉入裝有1mlLysis/Bindingbuffer的1.5ml離心管中,劇烈吹打渦旋混勻。b.可選,一般不需要:如果處理量大,有明顯顆粒或者不溶物,非常粘稠或者裂解不充分,可立即用帶針頭的一次性5ml(約0.9mm針頭)注射器抽打裂解物10次或直到得到滿意勻漿結果(或者電動勻漿30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產量。DNA提取的主要分類:真核生物DNA、細菌DNA、質粒DNA、細胞懸液DNA、組織DNA。南京組織DNA提取可測序
microRNA提取方法及步驟:頭一次使用前請先在70%乙醇、WashSolution1瓶和WashSolution2/3瓶中加入指定量乙醇!a.收集<107懸浮細胞到一個1.5ml離心管。(對于貼壁細胞,孔板培養(yǎng)和細胞瓶培養(yǎng)可以直接裂解,盡可能吸干凈所有培養(yǎng)液殘留后直接加入1ml的Lysis/Bindingbuffer,迅速輕搖使Lysis/Bindingbuffer充分和瓶底所有細胞接觸裂解細胞并滅活RNA酶,輕輕用移液槍反復吹打混勻。)b.13,000rpm離心10秒(或者300g離心5分鐘),使細胞沉淀下來。完全吸棄上清,留下細胞團,注意不完全棄上清會稀釋裂解液導致產量純度降低。c.輕彈管壁將細胞沉淀完全松散重懸,加入1mlLysis/Bindingbuffer,渦旋或者吹打,充分裂解混勻。鹽城DNA提取哪家專業(yè)RNA提取需要根據(jù)樣本的來源和類型進行優(yōu)化。
血漿DNA與血漿游離DNA提取試劑的選擇方法:血清血漿的量與DNA提取的核酸量成正比。因而,如果要提高核酸得率,可通過增加血清或血漿的量來實現(xiàn)。一般地,做血漿或血清核酸提取,樣本量較好在1ml以上。如果1ml或更大量樣本得不到滿意的檢測結果,則應及時考慮更換提取試劑盒。操作簡便性也是血漿DNA提取試劑選擇的一個重要因素。操作過于復雜,不只費時費力,還容易導致樣本間的交叉污染,也容易損失樣本。特別是用于臨床檢測或樣本較多情況下的檢測,操作復雜如果導致交叉污染會引起誤診,還會影響出檢測報告的時間。因而,選用操作簡便、流暢的提取試劑盒非常重要。
外泌體DNA提取過程:1、將吸附柱放入收集管內,將700μL上述溶液轉入吸附柱內,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液;將剩余溶液轉移至吸附柱內,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液。2、將吸附柱放回收集管內,加500μL洗滌液A至吸附柱內,靜置2分鐘,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液。3、將吸附柱放回收集管內,加500μL洗滌液B至吸附柱內,12,000rpm4℃離心1分鐘,棄收集管內廢液。4、按每份樣本40μL取洗脫液(如10份提取樣本,即取400μL洗脫液),放置于滅菌1.5mL離心管,65℃預熱。5、將吸附柱放回收集管內,12,000rpm4℃離心2分鐘,離去殘留的洗滌液。6、取出吸附柱,放入新的1.5mL離心管內,加入上述預熱的40μL洗脫液,靜置3分鐘,12,000rpm4℃離心1分鐘,收集DNA溶液。7、-20℃保存,或直接用于下一步實驗。DNA提取的樣品準備之生物組織:液氮勻漿法。
骨組織RNA提取方法及步驟:適用于快速提取骨組織細胞總RNA,使用獨有基因組DNA清理柱技術可有效清理電泳可見gDNA殘留,RNA可用于反轉錄PCR,熒光定量PCR等。骨組織堅硬、骨細胞密度低、而且外周基質含有大量黏蛋白(蛋白多糖)和RNA難以分離,無法用傳統(tǒng)Trizol法進行高質量提取。本方法采用獨有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液,并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時獨特基因組DNA清理柱技術可以有效清理gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉錄PCR、熒光定量PCR等實驗。獨特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,離心沉淀去除多糖和次級代謝產物,然后裂解混合物用乙醇調節(jié)RNA結合吸附到基因組DNA清理柱,然后RNA被選擇性洗脫濾過,吸附在基因組DNA清理柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清理掉DNA。濾過的RNA用乙醇調節(jié)結合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物,蛋白等雜質去除,較后低鹽的RNasefreeH20將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。RNA提取可以用于研究RNA的功能和相互作用。寧波血漿RNA提取
DNA提取的過程中需要注意消毒和安全措施,以避免污染和傷害。南京組織DNA提取可測序
血清血漿MicroRNA提?。喝〕鑫龀鲆汉拖礈煲?,按以下操作:a)析出液:4.5mL加入25.5mL無水乙醇;9mL加入51mL無水乙醇。b)洗滌液:9mL加入21mL無水乙醇;18mL加入42mL無水乙醇。c)配制好的析出液及洗滌液如出現(xiàn)沉淀,可在37℃溶解,搖勻后使用。取2.0mL離心管1支,依次加入1mL血清/血漿樣本、100μL溶液E、700μL溶液Q,上下顛倒混勻,室溫/4℃靜置20分鐘。12,000rpm4℃離心5分鐘,棄上清,收集離心管內沉淀。向沉淀中依次加入200μL裂解液、4μLRNACarrier、及20μL消化液,漩渦震蕩至沉淀完全分散,56℃水浴10分鐘。加入500μL析出液,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響RNA的提取與后續(xù)實驗。將吸附柱放入收集管內,將上述溶液轉入吸附柱內,靜置2min,12,000rpm4℃離心1min,棄收集管內廢液。南京組織DNA提取可測序
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