近年來,隨著細胞培養(yǎng)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,原代肝細胞在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用的作用越來越重要,取得了一系列重要進展。 首先,原代肝細胞在肝臟發(fā)育和再生方面的研究中發(fā)揮了重要作用。研究表明,原代肝細胞可以分化為多種肝細胞類型,如肝細胞、膽管細胞和星形細胞等,從而為肝臟發(fā)育和再生提供了重要的細胞來源。此外,原代肝細胞還可以通過體外培養(yǎng)和移植等方法促進肝臟再生和修復(fù)。 其次,原代肝細胞在肝臟疾病的研究中也有重要應(yīng)用。研究表明,原代肝細胞可以模擬肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展過程,如肝纖維化、liver cancer等,從而為疾病的機制研究和新藥開發(fā)提供了重要的實驗?zāi)P?。此外,原代肝細胞還可以用于篩選和評價肝臟疾病的藥物開發(fā)。 原代肝細胞在藥物代謝和毒性研究中也有重要作用。研究表明,原代肝細胞可以模擬肝臟對藥物的代謝和毒性反應(yīng),從而為藥物的安全性評價和藥代動力學(xué)研究提供了重要的實驗?zāi)P汀4送?,原代肝細胞還可以用于篩選和評價藥物的代謝和毒性。 原代肝細胞在基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用前景廣闊,將為肝臟生理和病理的研究以及藥物開發(fā)和安全性評價等方面提供重要支持肝原代細胞執(zhí)行著許多重要的功能,如毒物的分解、尿素的合成、制造血漿中的的大多數(shù)血漿蛋白質(zhì)等。上海大鼠原代肝細胞實驗
原代肝細胞也廣泛應(yīng)用于嵌合體肝模型當(dāng)中。通過將正常人原代肝細胞移植到患有嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(SCID)的肝特異uPA轉(zhuǎn)基因小鼠中,可以成功地構(gòu)建嵌合體肝。而轉(zhuǎn)基因小鼠的uPA表達能夠促使鼠肝細胞死亡,從而為人原代肝細胞的移植、重建和增殖提供了一個適宜的微環(huán)境。在這種重建的嵌合體肝內(nèi),人肝細胞占據(jù)了大約75%的比例,并且能夠持續(xù)高水平地表達人血清蛋白。 通過使用病人血清和病毒核酸影響這種嵌合體小鼠,研究人員發(fā)現(xiàn)在肝內(nèi)可以檢測到病毒的RNA。然而,病理觀察并未發(fā)現(xiàn)病毒影響所導(dǎo)致的細胞病變。這一發(fā)現(xiàn)為研究病毒影響的機制提供了新的途徑,并為開發(fā)解決病毒影響的新方法提供了新的思路。 此外,這項研究還為研究肝細胞移植和重建提供了新的實驗?zāi)P?。通過將人原代肝細胞移植到轉(zhuǎn)基因小鼠中,研究人員可以更好地研究原代肝細胞的生長、分化和功能,從而為克服肝病提供新的思路和方法。這項研究的結(jié)果具有重要的臨床意義,有望為克服肝病和病毒影響提供新的策略。河北鴨原代肝細胞購買立沃生物的原代肝細胞活力高,貼壁效果好,現(xiàn)貨供應(yīng),周期短,滿足基礎(chǔ)研究與藥物開發(fā)的個性化需求。
原代肝細胞也可以用于Organ-on-a-chip的構(gòu)建。Organ-on-a-chip是一項創(chuàng)新性的科技成果,它在載玻片大小的芯片上構(gòu)建了一個完整的生理組織微系統(tǒng),其中包含有原代肝細胞、肝非實質(zhì)細胞、生物流體和機械力所需微環(huán)境的關(guān)鍵要素。這個微型肝臟模型可以在體外模擬人體肝臟的主要結(jié)構(gòu)功能特征和復(fù)雜的組織間聯(lián)系,為藥物藥效評價、藥物安全性評價、化妝品安全性評價、食品安全性評價、環(huán)境保護評價等提供了一種全新的方法和手段。 這個微型肝臟模型的研發(fā),是在對傳統(tǒng)的肝臟模型進行改進和創(chuàng)新的基礎(chǔ)上實現(xiàn)的。傳統(tǒng)的肝臟模型通常是基于動物實驗或體外細胞培養(yǎng)的方法,但這些方法存在著很多的局限性和缺陷。例如,動物實驗不僅存在著倫理和道德問題,而且還存在著種屬差異、生理反應(yīng)差異等問題;而體外細胞培養(yǎng)則存在著細胞失活、細胞分化等問題。因此,Organ-on-a-chip的出現(xiàn),填補了這些傳統(tǒng)方法的空白,為科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用提供了更加可靠和有效的手段。
原代肝細胞的融合度是影響其生長和增值能力的重要因素之一。當(dāng)融合度達到70%以上時,細胞開始進入高度同步狀態(tài),細胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮,從而促進了細胞的生長和增殖。但是,如果融合度低于70%,細胞之間的相互作用就會受到限制,導(dǎo)致細胞的增值能力受到限制,無法達到100%。 此外,細胞之間的距離也是影響細胞生長和增值能力的重要因素之一。當(dāng)細胞之間的距離剛好是黃金分割點時,細胞開始進入高度同步狀態(tài),細胞之間的相互作用也得到了有效的發(fā)揮,從而促進了細胞的生長和增殖。但是,如果細胞之間的距離超過了黃金分割點,細胞就無法進入高度同步狀態(tài),從而導(dǎo)致細胞的增值能力受到限制。 細胞的培養(yǎng)密度也是影響細胞生長和增值能力的重要因素之一。低密度培養(yǎng)雖然可以保持細胞的功能,但是細胞的增值能力會很快丟失。而高密度培養(yǎng)可以維持細胞的功能一段時間,但是也會導(dǎo)致細胞之間的相互作用受到限制,從而影響細胞的生長和增殖。因此,在進行原代肝細胞的培養(yǎng)時,需要根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)密度,以保證細胞的生長和增值能力得到正常的發(fā)揮。原代肝細胞擁有肝臟的特性和功能,可以用于研究肝臟疾病的細胞信號傳導(dǎo)和細胞增殖,是有效的體外實驗?zāi)P汀?/p>
原代肝細胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細胞培養(yǎng)是一種常用的實驗方法,但在培養(yǎng)過程中,細胞可能會受到endotoxin的污染,這會影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。 endotoxin是一種由細菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì),可以引起炎癥反應(yīng)和細胞損傷。在原代肝細胞培養(yǎng)中,endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)器具或細胞本身。因此,需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑,例如聚陽離子樹脂(Polyclonal Cationic Resin,PCR)或聚乙烯醇(Polyvinyl Alcohol,PVA)。這些去除劑可以吸附endotoxin,從而減少其對細胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡單,只需要將其加入培養(yǎng)基中,然后將細胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測試劑盒來檢測培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測結(jié)果顯示endotoxin含量較高,可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測試劑盒外,還可以采取一些預(yù)防措施來減少endotoxin的污染。例如,使用無菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當(dāng)?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染,保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。立沃生物的原代肝細胞的分離技術(shù)門檻很高,需要特定的實驗室條件和技術(shù),嚴(yán)格的實驗室管理和質(zhì)量控制。天津羊原代肝細胞培養(yǎng)技巧
原代肝細胞是從新鮮的肝臟組織中分離出來的細胞。上海大鼠原代肝細胞實驗
原代肝細胞是藥物代謝研究的重要組成。原代肝細胞(Primaryhepatocytes)是指從動物肝臟直接分離的肝實質(zhì)細胞,具有不可替代的優(yōu)勢。原代肝細胞與體內(nèi)環(huán)境保持一致,酶量與輔助因子水平濃度與正常生理濃度貼合,滿足在接近生理狀態(tài)情況下研究藥物代謝和毒性的需求,真實反應(yīng)了體內(nèi)的代謝情況。同時,利用原代肝細胞在體外進行研究,無須擔(dān)心動物實驗的倫理問題,也減少了動物實驗所需的成本開支。目前,原代肝細胞已廣泛應(yīng)用于藥物研究,包括探討藥物在肝中的代謝途徑和藥物藥代動力學(xué)的研究;預(yù)測并解釋藥物—藥物間的相互作用;研究藥物的細胞毒性等。上海大鼠原代肝細胞實驗