歐易酵母文庫(kù)助力蘋果花青素合成調(diào)控機(jī)制研究。近日，山東農(nóng)業(yè)大學(xué)郝玉金、由春香教授為共同通訊作者，在ThePlantJournal(IF:6.141)期刊發(fā)表了題為“JasmonateinducesanthocyaninandproanthocyanidinbiosynthesisinapplebymediatingtheJAZ1-TRB1-MYB9complex”的研究論文，報(bào)道了茉莉酸通過(guò)介導(dǎo)JAZ1-TRB1-MYB9復(fù)合物誘導(dǎo)蘋果中花青素和原花青素的生物合成。山東農(nóng)業(yè)大學(xué)安建平博士為***作者，文章中酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)由歐易生物協(xié)助完成。酵母文庫(kù)篩選研究多年建庫(kù)與篩選經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)證。甘肅應(yīng)用酵母文庫(kù)

酵母文庫(kù)實(shí)驗(yàn)：本研究發(fā)現(xiàn)了一個(gè)硝酸鹽響應(yīng)的 BTB/TAZ 蛋白 MdBT2，它參與調(diào)節(jié)硝酸鹽介導(dǎo)的蘋果植株生長(zhǎng)。利用酵母雙雜交、蛋白質(zhì) pull-down、BiFC 實(shí)驗(yàn)證實(shí)，MdBT2 可以與一個(gè) DELLA 蛋白 MdRGL3a 互作，這種互作是 MdRGL3a 蛋白經(jīng)由 26S 蛋白酶體途徑的泛素化及降解所必需的。此外，異源表達(dá) MdBT2 部分回復(fù)了 MdRGL3a 過(guò)表達(dá)所導(dǎo)致的擬南芥生長(zhǎng)抑制。綜上表明，MdBT2 可以通過(guò)降低 DELLA 蛋白 MdRGL3a 的豐度促進(jìn)硝酸鹽介導(dǎo)的植物生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)顯示，培養(yǎng) 45 天，蘋果幼苗的高度和生物量隨硝酸鹽濃度的增加而增加（圖 A-C）。河南品質(zhì)酵母文庫(kù)報(bào)價(jià)酵母文庫(kù) 技術(shù)服務(wù)歐易生物分子互作一站式服務(wù)。

酵母雜交試驗(yàn):隨著分子生物學(xué)研究進(jìn)入以蛋白質(zhì)組學(xué)為標(biāo)志的后基因組時(shí)代，蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)-DNA相互作用已成為互作組學(xué)研究的熱門主題。人類基因粗略約編碼2萬(wàn)種蛋白，只算一對(duì)一的相互作用種類也有12萬(wàn)到100萬(wàn)種。而加上動(dòng)態(tài)變化，每個(gè)物種、個(gè)體、細(xì)胞中都存在著一張張不同的互作網(wǎng)絡(luò)圖，這一張張圖譜中，蘊(yùn)藏著各種生命的奧秘。有兩種通用的相互作用組圖譜繪制方式：第一種酵母雜交試驗(yàn)，通過(guò)偶聯(lián)基因表達(dá)體現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)發(fā)生直接相互作用的蛋白對(duì)。第二種是通過(guò)抗體/標(biāo)簽分離純化復(fù)合體，然后用質(zhì)譜鑒定復(fù)合體內(nèi)部組分，識(shí)別直接相互作用或間接相互作用的蛋白質(zhì)。兩種高通量方法彼此互補(bǔ)，相互驗(yàn)證。

酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明，PtMADS11 與 PtDAL1 之間存在直接的相互作用（圖 C），并通過(guò) BiFC、GST pull-down 得以證實(shí)（圖 D-E）。為進(jìn)一步研究在年齡信號(hào)調(diào)控中的作用機(jī)制，分別構(gòu)建了過(guò)表達(dá)PtDAL1和PtMADS11的擬南芥。與對(duì)照相比，過(guò)表達(dá)PtDAL1***提前了擬南芥的營(yíng)養(yǎng)-生殖時(shí)相轉(zhuǎn)換（圖A），證實(shí)PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了關(guān)鍵作用。過(guò)表達(dá)PtMADS11植株在短日照下表現(xiàn)出早開花和花序結(jié)構(gòu)過(guò)早終止，表明PtMADS11在開花調(diào)節(jié)和花序內(nèi)分生組織命運(yùn)起到調(diào)控作用。在擬南芥中利用年齡調(diào)控通路不同節(jié)點(diǎn)關(guān)鍵基因突變體進(jìn)行功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)PtDAL1可以恢復(fù)由于過(guò)表達(dá)miR156導(dǎo)致的開花延遲，但ft缺失會(huì)導(dǎo)致PtDAL1失活，PtDAL1過(guò)表達(dá)也不能恢復(fù)soc1-1-2突變體的表型，表明PtDAL1依賴或處于FT/SOC1的上游。而過(guò)表達(dá)PtMADS11可以恢復(fù)由過(guò)表達(dá)miR156或ft缺失導(dǎo)致的開花延遲，表明PtMADS11對(duì)開花的調(diào)控不依賴于miR156或FT。酵母文庫(kù)和測(cè)序建庫(kù)是什么？。

單雜交篩選為了挖掘影響ALA誘導(dǎo)蘋果黃酮醇積累的關(guān)鍵性調(diào)控因子，作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 為誘餌，通過(guò)酵母單雜交篩選了ALA處理后的蘋果愈傷組織cDNA文庫(kù)。結(jié)果顯示篩選出的蛋白質(zhì)主要參與光合作用調(diào)控、碳糖代謝、氧化/滲透脅迫響應(yīng)、***信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、木質(zhì)素生物合成、果實(shí)成熟發(fā)育等過(guò)程，以及一些功能未知的蛋白質(zhì)。其中， MdSCL8轉(zhuǎn)錄因子，由于其在草莓中的同源基因已被報(bào)導(dǎo)與黃酮的合成有關(guān)，引起了研究者的注意。進(jìn)一步通過(guò)Y1H assay驗(yàn)證確認(rèn)了MdSCL8可以與MdFLS1啟動(dòng)子互作（圖2A）。通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和GUS檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)MdSCL8可以負(fù)向調(diào)控MdFLS1啟動(dòng)子活性（圖2B-D）。專業(yè)化的篩庫(kù)流程，多重質(zhì)檢保證質(zhì)量。初篩+復(fù)篩提高目標(biāo)陽(yáng)性克隆質(zhì)粒精確度。甘肅應(yīng)用酵母文庫(kù)

根據(jù)每個(gè)客戶的研究目標(biāo)和內(nèi)容靈活定制研究方案。既能提供建庫(kù)服務(wù)，也能提供篩庫(kù)服務(wù)。甘肅應(yīng)用酵母文庫(kù)

酵母單雜交篩選：（4）在篩選到的轉(zhuǎn)錄因子中，***GL1促進(jìn)HIV-2轉(zhuǎn)錄。***GL1在免疫細(xì)胞中***表達(dá)，并與HIV的其他轉(zhuǎn)錄***因子，即Sp1、AP-1和PCAF/CBP/P300存在相互作用，本研究中顯示HEK293T細(xì)胞中，***GL1過(guò)表達(dá)后，與LTR連接的螢火素酶表達(dá)上升近2倍，說(shuō)明***GL1是一個(gè)轉(zhuǎn)錄***因子。值得一提的是，文章的背景介紹內(nèi)容中，對(duì)應(yīng)用其他技術(shù)（如RNAi、scRNA-seq、CRISPR等）對(duì)HIV轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向的已有成果分析，發(fā)現(xiàn)這些方法為HIV-1的復(fù)制和潛伏期提供了見解，但并沒(méi)有直接評(píng)估轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合和功能。文章中也對(duì)酵母單雜交技術(shù)與其他互作組技術(shù)（如Chip-seq、motif預(yù)測(cè)）進(jìn)行了比較分析，發(fā)現(xiàn)eY1H技術(shù)對(duì)已識(shí)別因子的驗(yàn)證率為30-60%，同等或優(yōu)于其他技術(shù)。甘肅應(yīng)用酵母文庫(kù)

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