培養(yǎng)基的使用:1.瓊脂培養(yǎng)基的融化:將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)基盡量減少重新加熱的時(shí)間,避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min),以免玻璃容器發(fā)生破裂。融化后的培養(yǎng)基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫,冷卻到47℃~50℃所需的時(shí)間取決于培養(yǎng)基的類型、體積和在水鍋里的分裝量。融化后內(nèi)培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用,放置時(shí)間一般不超過4h。剩余的培養(yǎng)基固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養(yǎng)基,應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),縮短融化后放置的時(shí)間。投資一臺(tái)高性能制備器可明顯降低實(shí)驗(yàn)失敗率,長(zhǎng)期節(jié)省時(shí)間和成本。中國(guó)香港自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基是生物制品領(lǐng)域中常用的物質(zhì),在細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)中十分必要,但是現(xiàn)有技術(shù)中有些培養(yǎng)基的某種組份容易分解,造成保存時(shí)間短等問題,導(dǎo)致培養(yǎng)基的使用成本十分高。其中,在動(dòng)物培養(yǎng)基中,谷氨酰胺是一種必要的組份,但是在常溫下,很短的時(shí)間內(nèi),約7-10日中培養(yǎng)基中的谷氨酰胺成份就可降解90%以上,這給其商品化帶來很大的困難。這樣的培養(yǎng)基在現(xiàn)有技術(shù)中很多,都具有上述的缺陷,例如,中國(guó)CN1087778C公開了一種雜交瘤細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基,其中包含有谷氨酰胺成份,但是這種培養(yǎng)基的保存時(shí)間十分有限,很難達(dá)到商業(yè)使用的目的。中國(guó)香港自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器**蒸汽加熱**(高壓滅菌鍋):需關(guān)注蒸汽生成速度及均勻性。
培養(yǎng)基的配置應(yīng)該注意的幾大步驟:常用玻璃儀器的準(zhǔn)備制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細(xì)吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈,晾干后備用。(1)平皿用紙或布包好,或裝在金屬盒內(nèi),于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干,備用。(2)試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好,再用布或報(bào)紙包扎好,121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干,備用。(3)吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽內(nèi)的氣體污染),然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內(nèi),于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干,備用。其他玻璃器皿均應(yīng)按上法處理,也應(yīng)裝金屬筒內(nèi)160℃干熱滅菌2h后,備用。
培養(yǎng)基制備的基本方法:1.培養(yǎng)基配方的選定:同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外.一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料.加以比較核對(duì)。2、培養(yǎng)基的制備記錄,每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)推各稱,配方及其來源.和各種成份的牌號(hào)。較終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制各的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份。3.培養(yǎng)基成分的稱取。培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂.較好一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜诎鴤?cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。5、培養(yǎng)塞pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正。緊急停止鍵卡滯可用酒精清潔觸點(diǎn)。
培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對(duì)象,二是取材過程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定?!队脛?dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。有些國(guó)家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國(guó)家要求無細(xì)菌噬菌體污染。對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。應(yīng)用于疫苗研發(fā)領(lǐng)域時(shí)能確保培養(yǎng)基無菌要求。 精確計(jì)時(shí)功能避免過度滅菌導(dǎo)致的營(yíng)養(yǎng)流失。中國(guó)香港自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器
高效加熱和冷卻能力是培養(yǎng)基制備器的重要性能,直接關(guān)聯(lián)滅菌可靠性、培養(yǎng)基質(zhì)量及實(shí)驗(yàn)效率。中國(guó)香港自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:正確制備培養(yǎng)基時(shí)微生物檢驗(yàn)的較基礎(chǔ)步驟之一。使用脫水培養(yǎng)基和其他成分,尤其是含有有毒物質(zhì)(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時(shí),應(yīng)遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。培養(yǎng)基的不正確制備會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關(guān)數(shù)據(jù),如質(zhì)量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制,記錄所有細(xì)節(jié)信息,如;培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級(jí)別、每個(gè)成分物質(zhì)含量、制造商、批號(hào)、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間)、配置日期、人員等,以便潮源。中國(guó)香港自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器