ThermoFisherQuantStudio3D是另一個經(jīng)典的芯片式數(shù)字PCR平臺，其基本的檢測流程是：將反應(yīng)液加入到涂布器中，通過涂布器將反應(yīng)液均勻涂布在有20000個微孔的芯片上，將芯片放在PCR儀上擴(kuò)增，將芯片放入讀取儀中采取拍照的方式讀取熒光信號。操作較為復(fù)雜，整個過程在封閉的芯片中進(jìn)行，污染的風(fēng)險較低。STILLANaica是一個較新的數(shù)字PCR平臺，基本的檢測流程是：將反應(yīng)液加入芯片，將芯片放入微滴生成擴(kuò)增系統(tǒng)，生成30,000個微滴單層平鋪于芯片中，PCR擴(kuò)增在芯片上完成。然后將擴(kuò)增后的芯片轉(zhuǎn)移至微滴閱讀分析系統(tǒng)，采取拍照的方式讀取熒光信號。由于整個過程在封閉的芯片中進(jìn)行，污染的風(fēng)險較低。影響dPCR定量結(jié)果的因素：儀器采用的分散方式與數(shù)量、溶液稀釋方法、分散體積的準(zhǔn)確性以及結(jié)果表達(dá)方式。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場前景

Drop-off實驗包括兩個針對相同擴(kuò)增子的TaqMan探針：與野生型序列互補(bǔ)而與突變位點不發(fā)生互補(bǔ)的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補(bǔ)的Reference探針（如圖1A）。在野生型等位基因的存在下，Drop-off探針和Reference探針都將與目標(biāo)雜交，產(chǎn)生雙重陽性信號（如圖1B，藍(lán)色群）。相反，如果存在突變的等位基因，即使一個核苷酸的突變也會阻止Drop-off探針與之雜交，因此只有Reference探針對目標(biāo)基因進(jìn)行退火，從而得到一個陽性信號。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場前景通過不同cluster的位置進(jìn)行突變位點的判斷時存在誤判的現(xiàn)象。

PCR（PolymeraseChainReaction）技術(shù)，即聚合酶連反應(yīng)，是一種擴(kuò)大和復(fù)制目的片段DNA的技術(shù)，其發(fā)現(xiàn)對于生命科學(xué)的發(fā)展具有重要的意義。而3D數(shù)字PCR到底是什么鬼？它其實是出現(xiàn)的一款PCR儀，其具有對目的DNA分子做出定量的優(yōu)點，進(jìn)而提供的準(zhǔn)確性、靈敏度。應(yīng)用該技術(shù)，實現(xiàn)對DNA進(jìn)行精確定量，精確度可通過復(fù)制次數(shù)實現(xiàn)。通過準(zhǔn)確性的進(jìn)行定量檢測基因，有助于臨床上在、病毒等疾病作參考。同時，其具有高通量，檢測速度快，成本相對低等優(yōu)點，為后期精細(xì)奠定基礎(chǔ)。

相比于cPCR技術(shù)和第二代qPCR技術(shù)，dPCR技術(shù)具有定量，可溯源至SI國際單位制摩爾；基質(zhì)成分干擾較小[51]；靈敏度高；對抑制劑的敏感性較低；適合多重轉(zhuǎn)基因檢測[52.53]，可提高分析效率；實驗條件優(yōu)化簡單[54]對實驗條件優(yōu)化的要求較低，適合多重基因檢測等優(yōu)勢，可為轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物提供準(zhǔn)確的量值保證，目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴，但隨著系統(tǒng)加工工藝的改進(jìn)以及使用較便宜的材料，聚合成更小的體積[556]，其價格將會不斷的降低，使其應(yīng)用到更多的檢測中。20世紀(jì)末，Bert Vogelstein等提出數(shù)字PCR的概念。

PCR常使用目標(biāo)序列的拷貝數(shù)或某一給定樣品中轉(zhuǎn)基因的百分比來體現(xiàn)方法靈敏度。由于qPCR和dPCR實驗過程所用試劑的兼容性較好，在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。使用不同技術(shù)對相同樣品檢測時，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765個微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測轉(zhuǎn)基因玉米MON810。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間，dPCR與qPCR的測量結(jié)果具有一致性。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時有被低估的風(fēng)險，在高于拷貝數(shù)1000時有被高估的風(fēng)險。dPCR在同一陣列上同時測量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點時，需要稀釋內(nèi)源性靶點和轉(zhuǎn)基因靶點在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。數(shù)字PCR的**原理：有限稀釋、終點PCR和泊松分布。蘇州臻準(zhǔn)數(shù)字PCR性能特點

在患者術(shù)后復(fù)發(fā)檢測中，數(shù)字PCR評估出的ctDNA陽性，可以早于影像學(xué)數(shù)月提前揭示出患者復(fù)發(fā)。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場前景

對于檢測需要高靈敏度以及技術(shù)確認(rèn)的情況下，數(shù)字PCR技術(shù)也可以發(fā)揮重要作用。技術(shù)數(shù)據(jù)表明，數(shù)字PCR技術(shù)對的比較低檢測下限可到2copies/ml，比qPCR靈敏度提升了100倍。經(jīng)測試，數(shù)字PCR在檢測和診斷的某些方面優(yōu)于金標(biāo)準(zhǔn)qPCR，尤其是在低病毒載量樣本中，相比起qPCR，數(shù)字PCR特異性、靈敏度、重現(xiàn)性和檢測限受影響更小。因此，未來預(yù)計數(shù)字PCR技術(shù)也將在類疾病中得到更加廣的應(yīng)用。數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣，除了可應(yīng)用于進(jìn)行突變的檢測以外，也可運(yùn)用于基因擴(kuò)增的檢測。通過數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重?zé)晒怏w系，用于同時檢測比如非小細(xì)胞肺中常見的MET和HER2耐藥擴(kuò)增。有研究報道，使用數(shù)字PCR技術(shù)對436例非小細(xì)胞肺樣品進(jìn)行檢測，并挑選樣本驗證了數(shù)字PCR與RNA fish的檢測一致性。結(jié)果表明，該數(shù)字PCR技術(shù)在保證了基因擴(kuò)增檢測準(zhǔn)確性的同時，還節(jié)約了檢測時間。上海進(jìn)口數(shù)字PCR市場前景

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