細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):因不含血清,批次間差異小。合肥無(wú)血清細(xì)胞凍存液平均價(jià)格
無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)勢(shì):簡(jiǎn)單、方便、快捷。1.即用型,無(wú)需現(xiàn)配,可直接使用。2.可孔板原位凍存,可微量?jī)龃妫瑹o(wú)需使用凍存管。3.無(wú)需程序降溫,可直接放置-80℃凍存,操作簡(jiǎn)單。4.不含血清,較大減少細(xì)胞污染。5.因不含血清,批次間差異小。6.無(wú)需液氮,-80℃冰箱長(zhǎng)期凍存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的方法:1.驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的細(xì)胞培養(yǎng)孔,將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈;2.加入適量Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液,充分浸潤(rùn)細(xì)胞(無(wú)需消化細(xì)胞);3.蓋上蓋板,直接放入-80℃冰箱,長(zhǎng)期冷凍保存。青島無(wú)血清細(xì)胞凍存液生產(chǎn)廠家無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:細(xì)胞凍存是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)常規(guī)技術(shù)。
細(xì)胞凍存:取出凍存管,注明細(xì)胞名稱,代數(shù),日期。離心后,以無(wú)菌吸管吸棄上清,不要吸到底部的細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻,根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果,將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細(xì)胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細(xì)胞凍存懸液分裝進(jìn)細(xì)胞凍存管中,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴(yán)密封口后,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低1℃?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,然后將凍存盒置于–80℃條件下過(guò)夜。若無(wú)凍存盒及其他凍存裝置,可以先將凍存管置于4℃30min,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過(guò)夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,置于液氮上方的氣相空間中儲(chǔ)存
無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液保存條件:儲(chǔ)存于4℃以下。質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,為期2年。3個(gè)月以上沒(méi)有使用凍存液計(jì)劃時(shí),盡可能-20℃冷凍保存。為避免重復(fù)凍融過(guò)程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱凍存。無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液細(xì)胞冷凍保存方法:選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1、按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2、按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。3、取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,置于離心管中,離心收集培養(yǎng)細(xì)胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min)。移去離心管中的上清液。4、加入適量的無(wú)血清型細(xì)胞凍存液于離心管中,使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻,制成細(xì)胞混合液。5、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。6、直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-70℃以下冰箱,長(zhǎng)期冷凍保存。7、若研究者需要液氮保存時(shí),可將完全凍結(jié)的凍存管(放入-70℃以下冰箱后至少一晝夜)移至-196℃液氮罐。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:胎牛血清取自牛,因此,難以應(yīng)用到需要避免接觸動(dòng)物源的應(yīng)用領(lǐng)域。
細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,起到了細(xì)胞保種的作用。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,利用凍存技術(shù)可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。目前現(xiàn)有技術(shù)中,細(xì)胞凍存液中的主要成分有10%二甲基亞砜(DMSO)、20%~90%胎牛血清(FBS)、剩余組分為完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)基以及FBS可為細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。DMSO是一種滲透性保護(hù)劑,能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn),減少冰晶的形成,從而達(dá)到降低細(xì)胞損傷的保護(hù)效果。但FBS屬于動(dòng)物源性物質(zhì),成分比較復(fù)雜,在臨床應(yīng)用上存在潛在的風(fēng)險(xiǎn),也增加了污染的幾率,并且由于凍存液中含有動(dòng)物血清,會(huì)導(dǎo)致凍存液的成分存在不穩(wěn)定的因素。無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色:可直接存放于-80℃冰箱凍存,無(wú)需經(jīng)過(guò)費(fèi)時(shí)的程序降溫過(guò)程(省時(shí)、省錢(qián))。重慶無(wú)血清細(xì)胞凍存液價(jià)格
無(wú)血清凍存液用途:細(xì)胞保藏中心,無(wú)血清細(xì)胞凍存液用于細(xì)胞株的長(zhǎng)期保存。合肥無(wú)血清細(xì)胞凍存液平均價(jià)格
無(wú)血清凍存液通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株(tumour細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞),凍存細(xì)胞可在-80℃長(zhǎng)期保存(>5年)。配方成分明確,不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,不含血清,可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細(xì)胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分,提高細(xì)胞存活率和活力,亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。該產(chǎn)品添加了細(xì)胞沉降穩(wěn)定劑,可延緩細(xì)胞在凍存過(guò)程中的沉降速率,防止細(xì)胞互相擠壓,影響細(xì)胞凍存效果。另外,添加了細(xì)胞膜保護(hù)劑、滲透性細(xì)胞膜內(nèi)保護(hù)劑、非滲透性細(xì)胞保護(hù)劑等多種冷凍保護(hù)劑,這些成分在溶液中同水分子結(jié)合,發(fā)生水合作用,弱化水的結(jié)晶過(guò)程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成,能較大降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷,有效提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。該產(chǎn)品配方成分明確,不含血清、不含動(dòng)物源性蛋白,可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細(xì)胞的安全;不光適用于常規(guī)細(xì)胞系、原代細(xì)胞,同時(shí)亦適合于無(wú)血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。合肥無(wú)血清細(xì)胞凍存液平均價(jià)格