3).無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細(xì)胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及。而有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,可以100%的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。Nacia數(shù)字PCRNaica數(shù)字PCR系統(tǒng)——簡便、快速地完成3通道檢測Naica數(shù)字PCR系統(tǒng)是法國Stilla公司開發(fā)的下一代核酸定量技術(shù)。使用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片——Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進(jìn)入2D芯片中,可稱作Crystal微滴。Naica數(shù)字PCR擴(kuò)增實驗在芯片上實現(xiàn)。對微滴成像用以檢測包含擴(kuò)增片段的微滴。一步是對陽性微滴計數(shù)從而得到的核酸數(shù)量。Naica數(shù)字PCR,結(jié)合了強(qiáng)大的圖像分析技術(shù)和直觀可視的檢測功能,從而達(dá)到了數(shù)字PCR定量的置信水平,獲得的數(shù)據(jù)真實可信。 PCR儀是為了解決在體外特異性地擴(kuò)增某個基因的問題,從而滿足對核酸的體外研究和應(yīng)用。國產(chǎn)核酸定量PCR儀規(guī)格有哪些
一對引物的Tm值相差盡量不超過2~3攝氏度,同時引物和產(chǎn)物的Tm值也不要相差太大,20攝氏度范圍內(nèi)較好。④引物的額外序列與退火溫度若有額外的序列信息要加到引物中,例如T7RNA聚合酶結(jié)合位點、限制酶切位點或者GC發(fā)夾結(jié)構(gòu)可以使用加長的引物。一般說來,引物5’端添加無關(guān)序列不會影響引物特異序列的退火。有時候,引物中添加了大量與模板不配對的堿基,可以在較低退火溫度的條件下進(jìn)行4到5個擴(kuò)增循環(huán);然后在假定引物5’端序列已經(jīng)加入到模板中,計算得出的退火溫度下進(jìn)行其余的循環(huán)。在引物上添加限制酶位點時一個重要的考慮是大多數(shù)限制酶的有效切割要求在它們的識別序列的5’端有2至3個非特異的額外堿基,這樣就會增加引物的非模板特異序列的長度。長引物序列的另一個缺點是影響溶解溫度的精確計算,而這對于確定PCR反應(yīng)時的退火溫度又是必須的。對于低于20個堿基的引物,Tm值可以根據(jù)Tm=4(G+C)+2(A+T)計算。而對于較長的引物,Tm值需要考慮動力學(xué)參數(shù)、從“近鄰位”的計算方式得到,現(xiàn)有的PCR引物設(shè)計軟件大多數(shù)都采用這種方式。⑤引物的3’末端核苷酸組成引物3’末端和模板的堿基完全配對對于獲得好的結(jié)果是非常重要的。 力康實時熒光PCR儀銷售價格實時熒光定量pcr儀,由熒光定量系統(tǒng)和計算機(jī)組成,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。
力康GM05智能梯度基因擴(kuò)增儀(控溫儀)性能特點:高清晰超大7寸液晶顯示屏-可選鍍金/鍍銀模塊,提高熱傳導(dǎo)效率,使實驗更高效;方便靈活的模塊更換裝置,輕松更換模塊;熱蓋旋鈕無級可調(diào),適用各型號試管;樣品座工作區(qū)域全密閉設(shè)計,可確保低溫保存干燥清潔;可任意角度定位熱蓋;具備斷電記憶功能;環(huán)境溫度自動讀取,自動修正溫控誤差;支持用戶實驗預(yù)約設(shè)定,鬧鐘提醒功能;支持程序搜索功能,支持常用程序優(yōu)先選擇功能;支持多重嵌套循環(huán);支持梯度PCR、TouchdownPCR、LongPCR設(shè)定;可外接移動硬盤和鼠標(biāo),支持觸摸和鼠標(biāo)操作;可實現(xiàn)遠(yuǎn)程故障判斷;具有TM值計算功能,可更好地幫助用戶進(jìn)行引物設(shè)計;可單獨(dú)配備PC機(jī)操作軟件,PC機(jī)與主機(jī)可分別各自控制,并實現(xiàn)一機(jī)多控。
基因?qū)嶒炇遗cPCR實驗室的規(guī)劃布局要求:1、環(huán)境要求通風(fēng)、溫度和濕度實驗室的長期使用,有毒、有害等污濁氣體不及時排出會危害室內(nèi)操作人員健康。實驗室良好的通風(fēng)環(huán)境是必要前提。除了實驗室建筑選址的朝向和所處地域的氣候特征,實驗室通風(fēng)系統(tǒng)也是必須考慮的問題。通風(fēng)柜作為保持實驗室內(nèi)安全、衛(wèi)生的重要柜體,是建立一個科學(xué)實驗室必不可少的組成部分。潔凈度實驗室的潔凈,除了實驗室地面、實驗室器具的清潔,還要考慮實驗室內(nèi)空氣的潔凈度。不良的空氣質(zhì)量會影響實驗的正常進(jìn)行,擴(kuò)散到空氣中的有害物質(zhì)也會危害到人體健康。2、設(shè)施要求給排水、排污系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的實驗室,都會配置有供水、排水和排污系統(tǒng),實驗臺配置水池、滴水架、排水槽,通風(fēng)柜與通風(fēng)柜管道聯(lián)通。3、實驗室工作人員要求PCR實驗室內(nèi)工作人員必須參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴(kuò)增培訓(xùn)班,并持證上崗。PCR實驗室通過驗收,實驗室至少必須應(yīng)有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實驗室必須建立嚴(yán)格的實驗室管理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序(SOP)、建立系列質(zhì)量管理文件等,確保實驗室日常運(yùn)行符合國家衛(wèi)生部的要求,確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確、確保實驗室衛(wèi)生安全。由于PCR簡便易行、靈敏度高等有點,該技術(shù)被應(yīng)用于多數(shù)分子實驗的研究中。
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經(jīng)常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合,再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應(yīng)溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。PCR儀實際就是一個溫控設(shè)備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進(jìn)行溫度控制。PCR擴(kuò)增儀又稱為PCR基因擴(kuò)增儀、PCR核酸擴(kuò)增儀、聚合酶鏈反應(yīng)核酸擴(kuò)增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應(yīng))技術(shù)對特定DNA擴(kuò)增的一種儀器設(shè)備,被運(yùn)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制以及親子鑒定等。 目前,PCR已成為實驗室中的一項常規(guī)技術(shù),是分子生物學(xué)家們不可缺少的工具.梯度PCR儀批發(fā)價
PCR擴(kuò)增過程中,熒光定量PCR儀通過熒光信號,對PCR進(jìn)程進(jìn)行實時檢測。國產(chǎn)核酸定量PCR儀規(guī)格有哪些
引物設(shè)計時使合成的寡核苷酸鏈(18~24聚物)適用于多種實驗條件仍不失為明智之舉。②引物的二級結(jié)構(gòu)包括引物自身二聚體、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、引物間二聚體等。這些因素會影響引物和模板的結(jié)合從而影響引物效率。對于引物的3’末端形成的二聚體,應(yīng)控制其ΔG大于,因為此種情形的引物二聚體有進(jìn)一步形成更穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的可能性,引物中間或5’端的要求可適當(dāng)放寬。引物自身形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu),也以3’端或近3’端對引物-模板結(jié)合影響更大;影響發(fā)卡結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性的因素除了堿基互補(bǔ)配對的鍵能之外,與莖環(huán)結(jié)構(gòu)形式亦有很大的關(guān)系。應(yīng)盡量避免3’末端有發(fā)卡結(jié)構(gòu)的引物。③引物GC含量和Tm值PCR引物應(yīng)該保持合理的GC含量。含有50%的G+C的20個堿基的寡核苷酸鏈的Tm值大概在56~62℃范圍內(nèi),這可為有效退火提供足夠熱度。一對引物的GC含量和Tm值應(yīng)該協(xié)調(diào)。協(xié)調(diào)性差的引物對的效率和特異性都較差,因為降低了Tm值導(dǎo)致特異性的喪失。這種情況下引物Tm值越高,其錯誤引發(fā)的機(jī)率也越大。若采用太高的退火溫度,Tm值低的引物對可能完全不發(fā)揮作用。在從一批在特定序列范圍內(nèi)已合成好的寡核苷酸中選擇一對新的引物時,這種GC含量和Tm值的協(xié)調(diào)非常關(guān)鍵。一般來說。 國產(chǎn)核酸定量PCR儀規(guī)格有哪些
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