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定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù):TMT(TandemMassTags)定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學(xué)技術(shù)是多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這種技術(shù)同TMT定量蛋白組學(xué)技術(shù)相似,可研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。蛋白質(zhì)組學(xué)在醫(yī)療和健康方面有什么應(yīng)用?貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究
定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù):定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要分為標(biāo)記(label)和非標(biāo)記(labelfree)定量策略,標(biāo)記策略又分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記兩種。細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動(dòng)態(tài)變化對(duì)各種生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程中,常常伴隨著某些蛋白質(zhì)的表達(dá)異常。定量蛋白質(zhì)組學(xué)就是把一個(gè)基因組表達(dá)的全部蛋白質(zhì)或一個(gè)復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行精確的定量和鑒定。非標(biāo)記(labelfree)的定量蛋白組學(xué)技術(shù),Labelfree定量蛋白組學(xué)技術(shù)是通過液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度,從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。南京醫(yī)學(xué)蛋白質(zhì)組學(xué)項(xiàng)目蛋白質(zhì)組學(xué)是以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象,研究細(xì)胞、組織或生物體蛋白質(zhì)組成及其變化規(guī)律的科學(xué)。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:特點(diǎn):(1)不同樣本標(biāo)記之后混樣,統(tǒng)一處理上機(jī),減少了分別上機(jī)造成的實(shí)驗(yàn)誤差,并利用同位素標(biāo)簽的豐度來檢測(cè),定量更準(zhǔn)確,重復(fù)性更好;(2)由于需要標(biāo)記試劑標(biāo)記,因此成本相對(duì)較高;(3)通量高,在一次實(shí)驗(yàn)中比較多可同時(shí)比較8個(gè)樣品;(4)利用基于同一個(gè)參考樣品的辦法,可以進(jìn)行多于8個(gè)樣品的定量比較;(5)iTRAQ的覆蓋度高、靈敏度高。Label-Free定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析:Label-Free定量,即非標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué),不需要對(duì)比較樣本做特定標(biāo)記處理,只需要比較特定肽段/蛋白在不同樣品間的色譜質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)便可得到樣品間蛋白表達(dá)量的變化,通常用于分析大規(guī)模蛋白鑒定和定量時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù)。
非標(biāo)定量法(Label-free)是通過比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度,分析不同來源樣品蛋白的數(shù)量變化,認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來,從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。按照其原理主要分為兩種,第1種spectrumcounts類的非標(biāo)記方法,發(fā)展比較早,已經(jīng)形成多種定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鑒定結(jié)果為定量基礎(chǔ),各種方法的差別在于后期算法在大規(guī)模數(shù)據(jù)上的修正。第二種非標(biāo)記定量的原理是以MS1為基礎(chǔ),計(jì)算每個(gè)肽段的信號(hào)強(qiáng)度在LC-MS上的積分。蛋白質(zhì)組與基因組相對(duì)應(yīng),也是一個(gè)整體的概念。
我們究竟怎么研究蛋白質(zhì)組學(xué)呢?抗體免疫的方法呢,其實(shí)就是ELISA,Western及蛋白質(zhì)芯片。通過合成大量蛋白質(zhì)特異的抗體,能夠進(jìn)行定性檢測(cè)及相對(duì)定量分析,只要你有好用的抗體,那么就可以通過免疫反應(yīng)讓抗體快速的識(shí)別你感興趣的蛋白質(zhì),然后用例如HRP發(fā)光等標(biāo)記方法顯示它們是否存在于你的樣品當(dāng)中?,F(xiàn)在已有的抗體不只能識(shí)別特定蛋白質(zhì),還能識(shí)別特定修飾的特定蛋白質(zhì)或者被特定修飾過的特定蛋白質(zhì)Motif。蛋白質(zhì)組與基因組相對(duì)應(yīng),也是一個(gè)整體的概念。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的本質(zhì)(從分析化學(xué)角度來看),就是對(duì)蛋白質(zhì)的定性定量分析。河南蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)
蛋白質(zhì)組學(xué)將成為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)比較有效的方法之一。貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究
定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法學(xué)背景和意義:從生命活動(dòng)的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律(特別是疾病防治和病理研究)已成為研究生命科學(xué)的主要手段。而這些研究往往離不開對(duì)細(xì)胞、組織中含有蛋白質(zhì)種類和表達(dá)量的研究。對(duì)處不同時(shí)期、不同條件下蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化的研究,識(shí)別功能模塊和路徑,監(jiān)控疾病的生物標(biāo)志物,這些研究都需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達(dá)分析提供了更可靠、動(dòng)態(tài)范圍更廣的研究手段。基于質(zhì)譜技術(shù),科學(xué)家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法,來了解細(xì)胞、組織或生物體的整體蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)。貴州DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究
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