蛋白質學組翻譯后修飾的類型:翻譯后修飾的類型包括N端fMet或Met的去除、二硫鍵的形成、化學修飾和肽鍵的裂解,其中磷酸化是比較常見的。蛋白質的化學修飾反應是在維持蛋白質的完整性和功能性的基礎上,通過基于其氨基酸殘基的化學反應獲得新的生物結合物。翻譯后修飾在哪里發(fā)生?翻譯后修飾主要發(fā)生在氨基酸側鏈或蛋白質的C端或N端?,F(xiàn)有的官能團或新官能團的引入可被用于修飾蛋白質,以擴展20個標準氨基酸的化學組成。翻譯后修飾的位點通常帶有可以在化學反應中充當親核試劑的官能團,如絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸的羥基;賴氨酸、精氨酸和組氨酸胺形式;同時,在蛋白質的N端和C端,天冬酰胺也可作為翻譯后修飾中的一種聚糖連接點。翻譯后修飾也發(fā)生在氧化的蛋氨酸和側鏈位點的一些亞甲基上。在細胞中,乙酰化修飾的反應由乙?;D移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D移并添加在蛋白質賴氨酸殘基上。南京蛋白質甲基化修飾組學方法
蛋白質乙酰化修飾組學定量分析:1. SILAC細胞標記,組織/細胞破碎,提取、提純目的蛋白質(基于SILAC的乙酰化修飾組學定量)。2. 使用胰蛋白酶將目的蛋白酶解成多肽片段。3. 對多肽片段進行iTRAQ標記(基于iTRAQ的乙?;揎椊M學定量)。4. 使用高效特異性乙酰化抗體對乙?;揎楇亩芜M行免疫富集。5. 使用LC-MS/MS對富集的乙?;亩芜M行序列分析。6. 數(shù)據分析,比對不同樣本中蛋白乙?;揎椝讲町悾Ξa生變化的生物學意義進行解釋。廣州蛋白質乙?;揎椊M學主要方式蛋白質磷酸化修飾組學具有全方面性。
蛋白翻譯后修飾:蛋白質氨基酸序列的特定位置可以與化學基團或者小分子量的蛋白共價結合從而發(fā)生蛋白質翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs)。翻譯后修飾是蛋白質生物合成的一個步驟,翻譯后多肽鏈在成為成熟的蛋白質產品之前要經過修飾,PTMs的類型包括磷酸化、乙?;⑻腔?、泛素化和二硫鍵等等,它導致蛋白質組復雜性的大幅增加。對于任何給定的蛋白質,各種各樣的PTMs提供了一種通過改變蛋白質的結構和功能來促進細胞快速變化的方法。PTMs在信號轉導、蛋白質穩(wěn)定性和周轉率、蛋白質與蛋白質識別和相互作用以及空間定位中起著至關重要的作用。
翻譯后修飾蛋白組學分析:蛋白質組學的研究的工作不只聚焦于細胞不同生長時期或是疾病條件下的蛋白質表達水平變化,許多至關重要的生命進程不只由蛋白質相對豐度控制,更重要的是被時空特異分布的、可逆的翻譯后修飾所調控,因而揭示翻譯后修飾發(fā)生規(guī)律是解析蛋白質復雜多樣的生物功能的一個重要前提。蛋白質發(fā)生翻譯后修飾時其分子質量會發(fā)生響應的改變,通過質譜能夠精確測定蛋白質或多肽的分子質量。同時,發(fā)生翻譯后修飾的蛋白質再樣本中含量低且動態(tài)范圍廣,所以在質譜檢測前需要對發(fā)生修飾的蛋白質或肽段進行富集。泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。
乙?;揎椀鞍踪|組學分析:乙?;揎椀鞍踪|組學分析是指從蛋白質組學的水平分析蛋白質乙酰化修飾,包括乙酰化蛋白質的鑒定和定量。提供基于質譜的乙?;鞍捉M研究服務。蛋白質乙?;ńM蛋白乙?;头墙M蛋白乙?;?。組蛋白乙?;饕琴嚢彼嵋阴;言诨蜣D錄調控作用方面被普遍的研究。非組蛋白乙酰化構成了哺乳動物細胞中乙?;鞍椎闹饕糠?,參與了所有主要生物過程,包括蛋白質的定位、轉移、功能和降解,遺傳物質的轉錄和復制等。除了重要的生物學功能以外,乙?;鞍踪|及其調控酶還與衰老和多種疾?。ㄈ缟窠涀冃挝蓙y、心血管疾病等)緊密相關。因此,對乙酰化修飾蛋白質組進行研究有助于進一步探索細胞的生命活動與了解相關疾病的發(fā)病機制。蛋白質翻譯后修飾在蛋白質中磷酸化位點分析時應該注意些什么問題?杭州蛋白質丙?;揎椊M學費用
乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類型。南京蛋白質甲基化修飾組學方法
質譜分析乙?;鞍踪|組:質譜分析技術可以對蛋白質組中的乙?;鞍走M行鑒定、乙?;稽c定位以及定量。當質譜用于乙?;康鞍捉M研究中時,因為乙?;鞍踪|在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,需要先對乙酰化肽段進行富集,然后再對富集得到的乙酰化肽段樣品進行定量分析。質譜定量乙?;鞍捉M采用肽段預分離降低高豐度蛋白的影響,結合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙?;碾亩危瑥亩鴮崿F(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩?,在酶切過程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進行酶切。南京蛋白質甲基化修飾組學方法
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