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河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

來源: 發(fā)布時間:2022-01-08

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運輸和定位,而且在分子識別、細胞通信、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用。河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)翻譯后修飾:蛋白質(zhì)的翻譯后修飾通過可逆的共價鍵將小分子或蛋白質(zhì)與底物蛋白質(zhì)上特定的氨基酸結(jié)合,調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級結(jié)構(gòu)的變化。各種蛋白質(zhì)翻譯后修飾在信號通路和網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,翻譯后修飾系統(tǒng)的紊亂將導(dǎo)致一系列疾病的發(fā)生。通過實驗的方法鑒定蛋白質(zhì)翻譯后修飾的位點需要耗費大量的資金和時間,并且酶反應(yīng)的優(yōu)化常常難以實現(xiàn)。而計算的方法則能夠快速、準確的預(yù)測酶特異性的底物蛋白質(zhì)及其修飾位點。深圳蛋白質(zhì)泛素化修飾組學(xué)分析方法蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點:檢測特異性高。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):翻譯后修飾自下而上分析策略:自下而上蛋白質(zhì)組學(xué)是一種基于肽段分析的技術(shù)。對于不同類型的翻譯后修飾,具體的分析策略存在差異。蛋白質(zhì)的糖基化具有異質(zhì)性。不同的糖鏈可以連接到同一位點上,不同位點可以連接到同一蛋白質(zhì)上的不同糖鏈上。糖基化的異質(zhì)性嚴重阻礙了糖蛋白的分離和分析。不同糖類型的相同蛋白質(zhì),在電泳上會出現(xiàn)分散的條帶,導(dǎo)致信號分散。此外,對低豐度蛋白質(zhì)的識別性差導(dǎo)致糖蛋白在色譜圖中分離不佳,質(zhì)譜中有一簇分子量不準確的分辨不清的峰。目前,蛋白糖基化研究的主要策略是利用現(xiàn)有的技術(shù)體系對糖基化蛋白的糖基化肽段進行分離和富集,消除糖基化的異質(zhì)性及其對質(zhì)譜的影響,標記糖基化位點。

質(zhì)譜分析乙?;鞍踪|(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對蛋白質(zhì)組中的乙酰化蛋白進行鑒定、乙?;稽c定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙?;康鞍捉M研究中時,因為乙?;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣,需要先對乙?;亩芜M行富集,然后再對富集得到的乙?;亩螛悠愤M行定量分析。質(zhì)譜定量乙?;鞍捉M采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩危诿盖羞^程中還可使用多種不同的酶對蛋白樣品進行酶切。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。

蛋白質(zhì)乙?;揎椂x:蛋白質(zhì)在細胞中經(jīng)過翻譯后,到被運輸?shù)较鄳?yīng)的細胞器并且發(fā)生特定的生物學(xué)作用前會經(jīng)過很重要的一步加工,那就是蛋白質(zhì)翻譯后修飾加工。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性、定位或功能。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復(fù)雜性。常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化,乙?;腔?,泛素化等。蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙?;鶊F。在細胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾,直到后來研究發(fā)現(xiàn)原核細胞中年也存在著蛋白質(zhì)乙?;揎棥K?,乙酰化修飾是原核和真核生物所共有的一種翻譯后修飾類型。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J為是真核細胞所特有的一種翻譯后修飾。四川蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)分析方法

蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析自中而下分析策略:自中而下的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可用于組蛋白修飾的分析。樣品制備與普遍使用的自下而上的分析策略相同,直到得到純化的組蛋白。提取組蛋白后,用GluC進行消化。然后用弱陽離子交換/親水相互作用色譜(WCX-HILIC)與配備電子轉(zhuǎn)移解離(ETD)的高分辨率質(zhì)譜聯(lián)機聯(lián)用,對樣品進行理想的分離。譜識別可以用傳統(tǒng)的軟件進行,但是由于估計適當(dāng)?shù)腻e誤發(fā)現(xiàn)率的問題,需要對結(jié)果進行過濾。自上而下的技術(shù)可以直接引入完整的蛋白質(zhì)并在串聯(lián)質(zhì)譜儀上對其進行片段化,不需要蛋白質(zhì)水解消化。目前,有兩種完全分離蛋白質(zhì)的方法:離線和在線。前者用四維分離法,后者用WCX-HILIC。河南泛素化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

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