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北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)有哪些

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-06

質(zhì)譜分析乙?;鞍踪|(zhì)組:質(zhì)譜分析技術(shù)可以對(duì)蛋白質(zhì)組中的乙酰化蛋白進(jìn)行鑒定、乙酰化位點(diǎn)定位以及定量。當(dāng)質(zhì)譜用于乙?;康鞍捉M研究中時(shí),因?yàn)橐阴;鞍踪|(zhì)在生物樣本中含量低、動(dòng)態(tài)范圍廣,需要先對(duì)乙酰化肽段進(jìn)行富集,然后再對(duì)富集得到的乙?;亩螛悠愤M(jìn)行定量分析。質(zhì)譜定量乙?;鞍捉M采用肽段預(yù)分離降低高豐度蛋白的影響,結(jié)合免疫共沉淀通過高效的抗體富集乙酰化的肽段,從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模乙?;蔫b定及定量。為了鑒定和定量更多的乙?;亩危诿盖羞^程中還可使用多種不同的酶對(duì)蛋白樣品進(jìn)行酶切。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)有哪些

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法: Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳:Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬(如Mn2+)配合物對(duì)磷酸基團(tuán)的親和,造成磷酸化蛋白遷移的滯留,再將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,用相應(yīng)蛋白的抗體識(shí)別,根據(jù)遷移滯留檢測蛋白磷酸化。技術(shù)優(yōu)勢特點(diǎn):1、無放射危害。2、鑒定不受限于特異性識(shí)別蛋白質(zhì)磷酸化的抗體。3、適用于大規(guī)模磷酸化蛋白分析。4、與質(zhì)譜鑒定兼容,進(jìn)行更為精細(xì)的分析鑒定。哈爾濱丙?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)蛋白磷酸化修飾過程是通過蛋白激酶催化,將磷酸基團(tuán)從ATP轉(zhuǎn)移到多肽底物的絲氨酸、或酪氨酸殘基上。

蛋白質(zhì)乙?;揎椀墓δ埽耗壳皩?duì)乙?;揎椀墓δ苎芯恐饕性趯?duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控,以及對(duì)代謝通路的調(diào)控這兩個(gè)方面。在眾多乙酰化修飾的蛋白質(zhì)中,研究較多的要數(shù)細(xì)胞核中包圍DNA的組蛋白了。組蛋白和DNA纏繞構(gòu)成核小體,組蛋白的甲基化、乙?;揎椖軌蛘{(diào)節(jié)DNA纏繞的松緊度,從而對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控,因此,組蛋白的翻譯后修飾是表觀遺傳學(xué)研究中的重要一環(huán)。另外,研究也發(fā)現(xiàn)乙?;揎椘毡榇嬖谟谌说亩喾N代謝酶之中,并且參與調(diào)控代謝通路以及代謝酶的活性。其中在肝臟這樣的代謝中就存在著多種代謝酶被高度乙?;?/p>

翻譯后修飾蛋白組分析:蛋白質(zhì)翻譯后修飾是影響蛋白質(zhì)功能并調(diào)節(jié)整個(gè)細(xì)胞過程的重要方式,幾乎在每個(gè)細(xì)胞過程中都是不可或缺的。分析和鑒定翻譯后修飾蛋白質(zhì)對(duì)揭示蛋白質(zhì)的功能和深入了解各種生理現(xiàn)象具有重要意義。大多數(shù)翻譯后修飾蛋白以低化學(xué)計(jì)量和豐度存在,這限制了在分析全細(xì)胞裂解液時(shí)對(duì)其的檢測。因此,要在蛋白質(zhì)組學(xué)的范圍內(nèi)表征翻譯后修飾蛋白,純化方法是必要的,以分離修飾蛋白和肽段,然后再進(jìn)行后續(xù)分析。后續(xù)分析一般采用質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行,可以對(duì)翻譯后修飾蛋白組進(jìn)行定性和定量研究。蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)具有有效性。

質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾:相對(duì)于蛋白質(zhì)印跡等技術(shù),質(zhì)譜技術(shù)能更有效的對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后修飾進(jìn)行分析,且可以對(duì)常規(guī)的Western blot 翻譯后修飾蛋白鑒定進(jìn)行補(bǔ)充。質(zhì)譜分析蛋白翻譯后修飾一般使用自下而上的基于肽段的方法。但是自下而上的質(zhì)譜方法無法保證可以完全識(shí)別目的蛋白的特定翻譯后修飾,因?yàn)橘|(zhì)譜是通過蛋白質(zhì)序列內(nèi)的多個(gè)肽段來鑒定的,這很大程度上降低了翻譯后修飾肽段被識(shí)別的機(jī)會(huì)。一種提高質(zhì)譜儀檢測到修飾肽段數(shù)量的策略是使用PTM親和試劑進(jìn)行肽段富集,而不是使用PTM親和試劑進(jìn)行蛋白富集,這將減少富集的未修飾肽段的數(shù)量。蛋白質(zhì)翻譯后修飾有什么生物學(xué)意義?廣東琥珀?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)價(jià)錢

泛素化修飾是一種重要的翻譯后修飾。北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)有哪些

蛋白質(zhì)翻譯后修飾的檢測方法:質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一,可以用于已知和未知的翻譯后修飾檢測。蛋白質(zhì)翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),如磷酸化、乙?;⒎核鼗?、SUMO化、糖基化等,大幅度的增加了蛋白質(zhì)組的復(fù)雜性。檢測蛋白質(zhì)的翻譯后修飾,了解它們?nèi)绾喂ぷ?、影響蛋白質(zhì)組和調(diào)控基因組將極大地提高我們對(duì)遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的理解。目標(biāo)蛋白的PTMs研究通常需要一個(gè)富集步驟,因?yàn)樾揎椀鞍椎呢S度一般較低。大多數(shù)PTMs檢測方法都是結(jié)合富集策略開發(fā)的,以比較好的識(shí)別、驗(yàn)證和研究目標(biāo)蛋白中PTMs的功能。北京蛋白質(zhì)氧化修飾組學(xué)有哪些

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