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廣州丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-04

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對于某一個(gè)特定肽段而言,在沒有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測過程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過二級質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾。廣州丙二酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):血漿蛋白糖基化修飾分析:蛋白質(zhì)糖基化指碳水化合物通過共翻譯或翻譯后修飾的方式附著到蛋白質(zhì)上的過程,是一種常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾。分泌的細(xì)胞外蛋白常被糖基化,糖基化蛋白通常是重要的整合膜蛋白。血漿中的蛋白質(zhì)包括維持機(jī)體正常生理狀態(tài)的蛋白質(zhì)和機(jī)體分泌、滲漏、脫落的蛋白質(zhì),其中不乏存在一些糖基化蛋白質(zhì)。而蛋白質(zhì)糖基化修飾不只影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活性、運(yùn)輸和定位,而且在分子識(shí)別、細(xì)胞通信、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此對血漿蛋白糖基化進(jìn)行分析,有助于研究血漿蛋白的生理功能等。廣東蛋白質(zhì)丙?;揎椊M學(xué)鑒定質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測的常用技術(shù)之一。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾自下而上分析策略:常用的糖蛋白分離和富集技術(shù)有:a. 凝集素親和技術(shù);b. 肼化學(xué)富集;c. 親水性相互作用色譜法;d. β-消除/邁克爾加成反應(yīng)?;谫|(zhì)譜的糖蛋白鑒定和糖基化位點(diǎn)測定方法有:a. PNGase F酶法;b. Endo H酶法;c. 三氟甲烷磺酸(TFMS)法。泛素化:泛素是一種由76個(gè)氨基酸組成的多肽,在真核生物中高度保守,可通過異肽鍵與目標(biāo)蛋白賴氨酸殘基的氨基進(jìn)行共價(jià)連接。泛素化蛋白的富集主要基于標(biāo)記,泛素用親和標(biāo)簽(通常為6xHis)進(jìn)行標(biāo)記,并通過鎳螯合色譜親和提取泛素化蛋白。由于泛素的C端為Arg-Gly-Gly結(jié)構(gòu),經(jīng)胰蛋白酶水解后,Gly-Gly保留在修飾蛋白的肽鏈上,使肽的質(zhì)量增加114,因此可作為泛素定位位點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)記。用HPLC對樣品進(jìn)行預(yù)分離,使用針對特定殘留結(jié)構(gòu)的抗體富集泛素化肽,可很大程度上提高泛素化蛋白的濃度。串聯(lián)質(zhì)譜可以鑒定泛素化位點(diǎn)。

蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用是蛋白質(zhì)發(fā)揮功能的主要機(jī)制之一,在DNA損傷修復(fù),自噬和代謝等過程中都扮演著非常重要的角色,蛋白相互作用異常便會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生.在蛋白質(zhì)的賴氨酸,絲氨酸和蘇氨酸等氨基酸殘基上,可發(fā)生甲基化,乙?;?磷酸化和泛素化等200多種翻譯后修飾,這些修飾通常能改變蛋白質(zhì)的電性,疏水性和空間結(jié)構(gòu)等屬性,為與之結(jié)合的蛋白提供結(jié)合的錨定或產(chǎn)生位阻效應(yīng),像一把開關(guān)在時(shí)空上精確調(diào)控蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的發(fā)生以及動(dòng)態(tài)變化.結(jié)構(gòu)研究表明,蛋白質(zhì)之間的相互作用通常由臨近的幾個(gè)氨基酸殘基直接結(jié)合,替換該區(qū)域的氨基酸殘基,通常能破壞結(jié)合,使其失去部分功能或酶活性,可以針對性地開發(fā)和設(shè)計(jì)抑制劑,用于疾病的診療。蛋白質(zhì)磷酸化修飾的免疫印跡技術(shù)優(yōu)點(diǎn):檢測特異性高。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾分析:組蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì),是染色質(zhì)的關(guān)鍵成分,是DNA包裝的結(jié)構(gòu)單位。組蛋白的功能受其翻譯后修飾介導(dǎo)。組蛋白翻譯后修飾包括通過絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化,賴氨酸或精氨酸的甲基化,賴氨酸的乙?;兔撘阴;?,賴氨酸的泛素化和磺?;葘M蛋白進(jìn)行的共價(jià)修飾。組蛋白這些修飾對于核完整性至關(guān)重要,因?yàn)樗鼈兛梢哉{(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)并募集參與基因調(diào)節(jié)、DNA修復(fù)和染色體濃縮的酶。組蛋白的翻譯后修飾大多位于N末端的尾巴上,因?yàn)镹末端是蛋白質(zhì)中比較暴露和比較靈活的區(qū)域。分析組蛋白翻譯后修飾有助于探索組蛋白修飾與染色體濃縮、DNA轉(zhuǎn)錄等生物功能之間的關(guān)系。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問題?廣州丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

蛋白質(zhì)磷酸化修飾怎么定義?廣州丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾?蛋白質(zhì)的翻譯后修飾()是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對于大部分的蛋白質(zhì)來說,這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分。通過向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來改變蛋白質(zhì)的性質(zhì),是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類型和功能。這個(gè)過程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄,并影響表觀遺傳學(xué)。廣州丙二?;揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)主要技術(shù)

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