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貴州circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)

來源: 發(fā)布時間:2021-12-23

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):10×genomics技術(shù):首先在凝膠微珠上種上特定的DNA的片段,DNA的片段由三部分組成:Barcode、UMI、PolyT組成。Barcode是16個堿基的長度。一共有400萬種Barcode,一個微珠是對應(yīng)于一種Barcode,通過這400萬種Barcode,可以把凝膠微珠給區(qū)分開(通過barcode可以把cell分開)。UMI是一段隨機(jī)序列,也就是說每一個DNA分子,都有自己的UMI序列(一個微珠上有很多種UMI,通過UMI可以把RNA分子分開,并可以標(biāo)記RNA分子的數(shù)量)。10個堿基長的UMI,有100萬種序列的變化(4^10=1,048,576),UMI的作用是為了區(qū)分哪些reads是來自于一個原始cDNA分子區(qū)分基因片段重復(fù)還是duplication及區(qū)分是真實的SNP位點還是PCR產(chǎn)生的突變。通過10×genomics儀器將單個細(xì)胞與單個凝膠微珠通過油相混在一起,形成油包水的小微滴。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序必須做生物學(xué)重復(fù)么?貴州circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)測試步驟:第1步就是把單個細(xì)胞分選出來。分選的方式也比較多,物理切割,酶消化,F(xiàn)ACS分選等。假如已經(jīng)分到了一個單細(xì)胞,跟常規(guī)的轉(zhuǎn)錄組步驟上是一樣的。下一步就是把單細(xì)胞里的RNA提取出來去建庫測序。但是一個細(xì)胞里的RNA含量是比較少的,難建庫成功。這個里面“量”的概念很有意思。比如說單細(xì)胞量少,需要特殊處理。因為單細(xì)胞里面RNA的量少,所以說整個富集的過程中會出現(xiàn)一部分基因在一個細(xì)胞里能檢測到,在另外一個細(xì)胞里面檢測不到,而每個細(xì)胞里面的檢測存在一個隨機(jī)性,同時單細(xì)胞測序深度比較低,所以說分析時相比于普通轉(zhuǎn)錄組有一些是需要特別注意,但整體的分析思路是類似的。河南IncRNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)分析轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于基因點突變及多態(tài)性檢測。

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù):Anydeplete技術(shù)首先通過隨機(jī)引物進(jìn)行一鏈合成,一鏈合成引入核苷酸類似物,用于酶切打斷,二鏈合成同樣引入核苷酸類似物用于保證鏈特異性。然后兩端加上接頭,接頭一條鏈也帶有核苷酸類似物,用于酶切降解。當(dāng)形成單鏈文庫后,設(shè)計特異性引物與rRNA形成文庫結(jié)合,一輪退火延伸,rRNA文庫形成雙鏈結(jié)構(gòu)。Reverseadaptor上帶有特異的酶切位點,當(dāng)形成雙鏈結(jié)構(gòu)酶切位點被識別,切去接頭,這樣rRNA形成的文庫不帶有完整的接頭,而其他文庫帶有完整接頭,通過PCR擴(kuò)增富積既能得到想要的信息,包含mRNA及LncRNA信息。同樣Anydeplete技術(shù)與10×genomics技術(shù)一樣,包含分子標(biāo)簽,可分析duplication及PCR產(chǎn)生突變位點。

單細(xì)胞RNA-seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)工作流程:單細(xì)胞RNA測序等高通量單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)通常從針對不同瘤和組織類型(解離、分選和分離細(xì)胞等)量身定制的實驗工作流程開始,然后產(chǎn)生可以比對的序列,量化、質(zhì)量控制(QC)過濾和以不同方式標(biāo)準(zhǔn)化,以實現(xiàn)許多下游計算分析,例如聚類分析以識別轉(zhuǎn)錄不同的細(xì)胞類型和亞群,等位基因分析以識別單核苷酸變異(SNV,用星號表示)或拷貝數(shù)變體(CNV)、軌跡分析、剪接檢測或瘤的微環(huán)境(TME)相互作用的推斷中。單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)的分析通常因精心設(shè)計的研究設(shè)計而變得復(fù)雜,這些設(shè)計可能包括來自患病和未患病個體的樣本、在不同時間點(例如,診療前和診療后)收集的同一個人的多個樣本,或來自表現(xiàn)出不同疾病狀態(tài)的不同個體的多個樣本。這樣的研究設(shè)計可以發(fā)現(xiàn)患者共享的轉(zhuǎn)錄特征,這些特征可能定義疾病中常見的干擾分子途徑。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和。

宏轉(zhuǎn)錄學(xué)組概念:宏轉(zhuǎn)錄組測序是對某一特定時期、特定環(huán)境樣品中的全部微生物的RNA進(jìn)行高通量測序,直接獲得該環(huán)境中所有微生物轉(zhuǎn)錄組信息的一種測序技術(shù)的新應(yīng)用。宏轉(zhuǎn)錄組中不只包含有微生物的物種信息,還有微生物的基因表達(dá)信息。如果說宏基因組能告訴我們微生物群,那么宏轉(zhuǎn)錄組則能告訴我們這些微生物,這有助于挖掘微生物功能基因和探索微生物與環(huán)境、疾病、動植物等關(guān)系的機(jī)制。宏轉(zhuǎn)錄組分析:從以G為單位的高通量測序數(shù)據(jù)中獲取研究所需的微生物種類、基因、通路等信息是進(jìn)行宏轉(zhuǎn)錄組研究必須經(jīng)歷的一步?,F(xiàn)在網(wǎng)絡(luò)上分析組學(xué)數(shù)據(jù)的工具五花八門。能否從眾多組學(xué)工具中選擇出適合分析宏轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的軟件,能否搭建一套完整、快速、高效、靈敏、高精確的宏轉(zhuǎn)錄組分析pipline,直接關(guān)乎到后期數(shù)據(jù)分析的進(jìn)行。轉(zhuǎn)錄學(xué)組測序是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜性的強(qiáng)大工具。湖北靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)應(yīng)用

轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?貴州circ RNA轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)

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