蛋白質(zhì)翻譯后修飾的重要性:翻譯后修飾可以發(fā)生在蛋白質(zhì)生命周期的任何階段。例如,許多蛋白質(zhì)在翻譯完成后不久就被修飾,以介導(dǎo)適當?shù)牡鞍踪|(zhì)折疊或穩(wěn)定,或?qū)⑿律鞍踪|(zhì)引導(dǎo)到不同的細胞區(qū)室(例如,細胞核、膜)。折疊和定位完成后發(fā)生其他修飾,以刺激或滅活催化活性或以其他方式影響蛋白質(zhì)的生物活性。蛋白質(zhì)也與靶向降解蛋白質(zhì)的標簽共價連接。除了單一的修飾外,蛋白質(zhì)通常還通過翻譯后切割和通過蛋白質(zhì)成熟的分步機制增加功能基團的組合進行修飾。分析蛋白質(zhì)及其翻譯后修飾對于心臟病、神經(jīng)退行性疾病和糖尿病的研究尤為重要。PTMs 的特征,雖然具有挑戰(zhàn)性,但提供了對病因?qū)W過程下的細胞功能的無價的洞察。在技術(shù)上,研究翻譯后修飾蛋白的主要挑戰(zhàn)是開發(fā)特異性的檢測和純化方法。幸運的是,這些技術(shù)障礙正在用各種新的和精煉的蛋白質(zhì)組學技術(shù)來克服。通過蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進一步增加了細胞通路機制和生命活動的多樣性和復(fù)雜性。貴州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學分析
定量磷酸化蛋白質(zhì)翻譯修飾組學:蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾,它與信號傳導(dǎo)、細胞周期、生長發(fā)育機理等諸多生物學問題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合,實現(xiàn)對磷酸化蛋白質(zhì)組學的定量研究。技術(shù)原理:在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標記,然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段,之后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對樣品的定量分析。貴州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學分析蛋白質(zhì)的翻譯后修飾過程極其復(fù)雜。
蛋白質(zhì)糖基化修飾組學技術(shù)服務(wù):糖基化是在酶的控制下,蛋白質(zhì)或脂質(zhì)附加上糖類的過程,發(fā)生于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等部位。在糖基轉(zhuǎn)移酶作用下將糖轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì),和蛋白質(zhì)上的氨基酸殘基共價結(jié)合。蛋白質(zhì)經(jīng)過糖基化作用,形成糖蛋白。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用,有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能作用。凝素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學中應(yīng)用比較普遍的分離富集方法。凝集素(lectin)是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì),能專一識別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與之結(jié)合,它們與糖鏈可逆非共價結(jié)合,糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后,通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。
蛋白質(zhì)翻譯后修飾加入的官能團反應(yīng)有:1、乙?;ǔS诘鞍踪|(zhì)的N末端加入乙酰。2、烷基化——加入如甲基或乙基等烷基。3、甲基化——烷基化中常見的一種,在賴氨酸、精氨酸等的側(cè)鏈氨基上加入甲基。4、生物素化——用生物素附加物令保存的賴氨酸?;?。5、谷氨酸化——在谷氨酸與導(dǎo)管素及其他蛋白質(zhì)之間建立共價鍵。6、甘氨酸化——在一個至超過40種甘氨酸與導(dǎo)管素的C末端建立共價鍵。7、糖化——將糖基加入天冬酰胺、羥離氨酸、絲氨酸或蘇氨酸,形成糖蛋白。8、異戊二烯化——加入如法呢醇及四異戊二烯等異戊二烯。9、硫辛酸化——附著硫辛酸的功能性。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價修飾方式之一。
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學有些什么?泛素化可以生產(chǎn)出單泛素化或多泛素化蛋白質(zhì)。后者在當7個賴氨酸殘基的泛素與另一個泛素的甘氨酸C端連接形成。這種泛素分子鏈接在生物過程中起到重要的作用。共價結(jié)合泛素的蛋白質(zhì)能被蛋白酶識別并降解,這是細胞內(nèi)短壽命蛋白質(zhì)和一些異常蛋白降解的普遍途徑。泛素化及類泛素化蛋白在細胞分裂,自噬,DNA修復(fù),免疫應(yīng)答,細胞消亡等方面同樣起到關(guān)鍵作用。與消化道內(nèi)進行的蛋白質(zhì)水解不同,從泛素與蛋白的結(jié)合到將蛋白水解成小的肽段,整個水解過程需要能量參與。人們開始意識到泛素-蛋白酶系統(tǒng)是一個對于真核細胞非常重要的調(diào)節(jié)系統(tǒng)。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級結(jié)構(gòu)的變化。貴陽亞硝基化修飾蛋白質(zhì)組學技術(shù)服務(wù)
常見的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括泛素化。貴州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學分析
泛素化修飾蛋白質(zhì)組學樣品要求:1、動物組織的樣品量濕重不少于200mg。2、植物細菌、噬菌體等微生物類樣品量濕重不少于2g。3、富含雜質(zhì)或蛋白質(zhì)含量低的樣品量濕重不少于5g;如植物的根,木質(zhì)部、韌皮部組織等。4、體液類(唾液、羊水、腦脊液等)10mL以上,要保證不能溶血;血清要求500μl以上;尿液要求50mL以上。5、如直接提供蛋白質(zhì)提取物,濃度不少于2 mg/mL,總量不少于1 mg。為保證實驗效果,請盡量告知緩沖液成分,如是否有硫脲、SDS、強離子鹽等等。另樣品中應(yīng)不含核酸、脂類、多糖等影響分離效果的成分。6、在細胞器蛋白質(zhì)組學方面,提取細胞器或亞細胞器后,蛋白沉淀量在1 mg以上。貴州甲基化修飾蛋白質(zhì)組學分析