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非靶向代謝組學(xué)分析流程:1、代謝譜分析(也稱為差異表達(dá)分析):在一組實(shí)驗(yàn)和對(duì)照樣品中,尋找豐度改變有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的感興趣代謝物;2、鑒定:進(jìn)行代謝譜分析后,測(cè)定這些代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu);3、解釋:研究流程的結(jié)尾的一步,解釋所發(fā)現(xiàn)的代謝物與生物過程或生物狀態(tài)之間的關(guān)聯(lián)。代謝組學(xué)主要是對(duì)生物體受到內(nèi)部(基因)或外部(飲食、環(huán)境等)刺激后所發(fā)生生物響應(yīng)進(jìn)行綜合分析的研究工具,代謝組學(xué)的研究按照研究目的的不同可分為靶向代謝組學(xué)和非靶向代謝組學(xué)。代謝組學(xué)是用來解決什么問題的呢?河南非靶向代謝組學(xué)分析研究
靶向代謝組學(xué)的一般分析流程為:1. 數(shù)據(jù)采集 第1步是得到標(biāo)準(zhǔn)品。如果無法從市場(chǎng)上買到,就必須定制合成。然后通過優(yōu)化產(chǎn)物離子碰撞能量以得到的信號(hào),再通過測(cè)定三重串聯(lián)四極桿測(cè)定代謝物的 MRM 躍遷值。2. 定量 接下來用定量分析軟件對(duì) MRM 數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,得到報(bào)告。3. 統(tǒng)計(jì)分析和解釋 將定量報(bào)告輸入統(tǒng)計(jì)分析軟件包,用統(tǒng)計(jì)工具,如ANOVA,對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。靶向分析:在基于質(zhì)譜的代謝組學(xué)分析中,要意識(shí)到離子強(qiáng)度和色譜保留時(shí)間都會(huì)隨著時(shí)間的推移而產(chǎn)生漂移,所以在實(shí)驗(yàn)中,要按隨機(jī)順序?qū)颖具M(jìn)行檢測(cè),且數(shù)據(jù)需要在同天同一批次進(jìn)行采集,以減少誤差。河南非靶向代謝組學(xué)分析研究代謝組學(xué)的研究方法與蛋白質(zhì)組學(xué)的方法類似,通常有兩種方法。
GC-MS非靶向代謝組學(xué)醫(yī)學(xué)分析生物樣本為何要衍生化處理?有哪些衍生化的方法?GC的流動(dòng)相為氣體(通常為高純氦),這就要求被分析物必須能夠氣化,而生物樣本中很多內(nèi)源性代謝物都含有極性基團(tuán),具有沸點(diǎn)高、不易氣化特點(diǎn)。衍生化能夠降低這些代謝物的沸點(diǎn),增加它們的熱穩(wěn)定性,以便分析能夠順利進(jìn)行。衍生化方法及試劑種類繁多,根據(jù)不同的分析目標(biāo),需選擇合適的衍生化方法。如分析脂肪酸,我們可以采用甲酯化衍生。在GC/MS代謝平臺(tái)上,比較常用的衍生化方法是硅烷化衍生,因?yàn)樗膹V譜高效。在進(jìn)行硅烷化衍生之前,還需添加甲氧胺吡啶溶液,以封閉羰基(針對(duì)α-酮酸和糖類,保護(hù)作用),減少衍生化副產(chǎn)物的生成。
代謝組學(xué)概念:代謝組學(xué)(metabonomics/metabolomics)是效仿基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研究思想,對(duì)生物體內(nèi)所有代謝物進(jìn)行定量分析,并尋找代謝物與生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究方式,是系統(tǒng)生物學(xué)的組成部分。其研究對(duì)象大都是相對(duì)分子質(zhì)量1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)。先進(jìn)分析檢測(cè)技術(shù)結(jié)合模式識(shí)別和**系統(tǒng)等計(jì)算分析方法是代謝組學(xué)研究的基本方法。代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后新近發(fā)展起來的一門學(xué)科,是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分。代謝組學(xué)在食品安全領(lǐng)域,利用代謝組學(xué)工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動(dòng)植物體內(nèi)的相關(guān)生物標(biāo)志物也是一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域。
代謝組學(xué)概念:代謝組學(xué)主要研究的是作為各種代謝路徑的底物和產(chǎn)物的小分子代謝物(MW<1000)。 在食品安全領(lǐng)域,利用代謝組學(xué)工具發(fā)現(xiàn)農(nóng)獸藥等在動(dòng)植物體內(nèi)的相關(guān)生物標(biāo)志物也是一個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域。其樣品主要是動(dòng)植物的細(xì)胞和組織的提取液。主要技術(shù)手段是核磁共振(NMR),質(zhì)譜(MS),色譜(HPLC,GC),其中以NMR為主。通過檢測(cè)一系列樣品的NMR 譜圖,再結(jié)合模式識(shí)別方法,可以判斷出生物體的病理生理狀態(tài),并有可能找出與之相關(guān)的生物標(biāo)志物(biomarker)。代謝組學(xué)的代謝產(chǎn)物是基因表達(dá)的產(chǎn)物。江蘇LC-MS/MS非靶向脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析
代謝組學(xué)的研究介于基因、蛋白質(zhì)和細(xì)胞、組織之間。河南非靶向代謝組學(xué)分析研究
什么是非靶向代謝組學(xué)、靶向代謝組學(xué)?(1) 非靶向代謝組學(xué)(Untargeted metabolomics)即非目標(biāo)代謝組學(xué)或發(fā)現(xiàn)代謝組學(xué),無偏向性地對(duì)所有小分子代謝物(一般相對(duì)分子量小于1000)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)分析的代謝組學(xué)。(2) 靶向代謝組學(xué)(Trgeted metabolomics)則為目標(biāo)性代謝組學(xué),著重對(duì)于設(shè)定好的目標(biāo)代謝物進(jìn)行定性、量檢測(cè)分析和研究。相比于其他組學(xué),代謝組學(xué)有哪些特殊的優(yōu)勢(shì)?系統(tǒng)生物學(xué)有基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白組學(xué)和代謝組學(xué)。代謝組學(xué)作為系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)重要的分支,與其他組學(xué)相比有著其特有的優(yōu)勢(shì),主要體現(xiàn)在以下幾點(diǎn):(1) 基因與蛋白質(zhì)表達(dá)的微小變化會(huì)在相應(yīng)代謝物水平上得到放大,更容易被檢測(cè)。(2) 代謝物的種類要遠(yuǎn)小于基因和蛋白的數(shù)目。(3) 可與生物表型變化建立直接相關(guān)性。河南非靶向代謝組學(xué)分析研究