定量蛋白質組學技術:TMT定量蛋白組學技術:TMT(TandemMassTags)定量蛋白質組學技術多肽體外標記定量技術。這種技術采用多個(2-10)穩(wěn)定同位素標簽,特異性標記多肽的氨基基團進行串聯質譜分析,能夠同時比較多達10種不同樣本中蛋白質的相對含量,可用于研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。iTRAQ定量蛋白組學技術是多肽體外標記定量技術。這種技術同TMT定量蛋白組學技術相似,可研究不同病理條件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質表達水平的差異。蛋白質組研究技術涉及到各種重要的生物學現象,如信號轉導、細胞分化、蛋白質折疊等等。杭州PRM靶向定量蛋白質組學鑒定
蛋白質組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質組學(Proteomics)是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。labelfree-非標定量法分析技術方法:非標定量法[Labelfree]是近年來重要的質譜定量方法,通過比較質譜分析次數或質譜峰強度,分析不同來源樣品蛋白的數量變化。蛋白質非標記定量技術(LabelFree)是通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析,無需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標簽做內部標準,只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據,比較不同樣品中相應肽段的信號強度,從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。上海PRM定量蛋白質組學技術蛋白質組學技術有電噴霧質譜。
蛋白組究竟研究的是什么呢?第1,蛋白質定性,或者說大規(guī)模檢測某些蛋白質是否存在于樣品當中;第2,蛋白質定量,也就是大規(guī)模檢測某些蛋白質的含量(包括一定含量與相對含量);第3,蛋白質翻譯后修飾,這些修飾主要包括磷酸化,泛素化,糖基化,乙?;鹊?,也包括對這些翻譯后修飾的定量研究。這三大塊中所提到的大規(guī)模,既可以是樣品數量的大規(guī)模高通量,也可以是少量樣本中蛋白數量的大規(guī)模高通量。研究原因:首先,由于翻譯調控和翻譯后調控的存在,RNA的表達量與實際對應蛋白質的含量相關性并不高,就簡單地測試了酵母中mRNA和對應蛋白質的定量相關性,結果是,低豐度蛋白與mRNA的相關性尤其低,而高豐度蛋白和其mRNA的相關性則高,經過平均后r值只為0.4。
我們究竟怎么研究蛋白質組學呢?目前高通量檢測蛋白質的方法中,還是首推基于質譜的方法,納流液相可以將復雜樣品中的肽段高效地分離,然后依次進入質譜,對每個被離子化的肽段及其碎裂后碎片的荷質比進行分析,從而得到該肽段的序列信息,然后根據對應的色譜峰面積或者報告離子強度等信息,我們又可以得到該肽段的定量信息。蛋白組學研究怎么做?當下蛋白組學研究中應用比較普遍的技術是同位素標記定量(iTRAQ/TMT技術)。iTRAQ/TMT技術是利用DDA掃描模式,其掃描的方式是將一級質譜信號比較強的Top20的多肽進行二級打碎,然后進入二級質譜進行檢測。其優(yōu)勢是二級譜圖采集的肽段信息都來源于同一條多肽,有利于后續(xù)的定性分析。在未來的發(fā)展中,蛋白質組學的研究領域將更加普遍。
蛋白組學研究怎么做?PRM:平行反應監(jiān)測(ParallelReactionMonitoring)是一種基于高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質/肽段進行一定定量,因此也被稱之為基于液相色譜質譜聯用技術的WesternBlot(LC-MSMSbasedWesternBlot,L-WB)。PRM技術基于Q-Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜平臺,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在Collisioncell中對母離子進行碎裂,之后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣即可對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。在對早老性癡呆等人類重大疾病的臨床診斷和治理方面蛋白質組技術也有十分誘人的前景。上海PRM定量蛋白質組學技術
蛋白質組學包括翻譯后的修飾。杭州PRM靶向定量蛋白質組學鑒定
我們究竟怎么研究蛋白質組學呢?抗體免疫的方法呢,其實就是ELISA,Western及蛋白質芯片。通過合成大量蛋白質特異的抗體,能夠進行定性檢測及相對定量分析,只要你有好用的抗體,那么就可以通過免疫反應讓抗體快速的識別你感興趣的蛋白質,然后用例如HRP發(fā)光等標記方法顯示它們是否存在于你的樣品當中?,F在已有的抗體不只能識別特定蛋白質,還能識別特定修飾的特定蛋白質或者被特定修飾過的特定蛋白質Motif。蛋白質組與基因組相對應,也是一個整體的概念。杭州PRM靶向定量蛋白質組學鑒定
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