蛋白質組學,指對某一基因組所表達的所有蛋白質及其特征進行大規(guī)模、系統(tǒng)化地研究,以期望在蛋白質水平上解釋控制復雜的生命活動的分子網絡。研究的內容主要包括:組成蛋白質一級結構氨基酸的序列特征、蛋白質的豐度、蛋白質活性、蛋白質的修飾、亞細胞定位和三維結構、蛋白質之間的相互作用以及對蛋白質的高階復合物結構。質譜技術的發(fā)展為這些研究提供了有力的技術支撐,使得許多有實際應用的蛋白質組功能研究成為可能,包括翻譯后修飾的整體分析,蛋白質相互作用網絡的重建和模式生物蛋白表達譜的定量研究;在臨床醫(yī)學和轉化醫(yī)學研究中也越來越多地應用到蛋白質組學技術。蛋白質組學由此獲得蛋白質水平上的關于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。河南外泌體蛋白質組學技術
PRM靶向蛋白組學:PRM技術是一種根據已知實測信息或質譜檢測規(guī)律的假定信息對樣品中的蛋白質進行靶向定量的技術。該技術主要應用儀器為QExactive系列質譜儀,首先以四極桿作為質量過濾器,特異性地選擇與預先設定質荷比相同的肽段離子(母離子)通過,隨后在高能碰撞池中碎裂母離子,之后通過Orbitrap分析碎片離子(子離子)得到肽段的二級質譜信息。四極桿的高選擇性離子過濾與Orbitrap高分辨率測量技術的結合使得PRM技術有很高的特異性,并且有效的降低了背景噪音,去除了干擾離子,提高了靈敏度。在確保數據質量的前提下,為了在一次分析中檢測更多的蛋白質,可用預置PRM(ScheduledPRM,sPRM)的方法,這種方法需要知道每個肽段的保留時間信息,使得每個肽段只在其洗脫時間窗口內執(zhí)行PRM檢測,很大程度上提高了檢測效率,可同時檢測上百種蛋白質。PRM技術是目前應用較普遍的質譜蛋白質靶向定量技術。杭州新型修飾蛋白組學分析方法近兩年來蛋白質組研究技術已被應用到各種生命科學領域,如細胞生物學、神經生物學等。
蛋白質組學:蛋白質組一詞,源于蛋白質與基因組兩個詞的組合,意指“一種基因組所表達的全套蛋白質”,即包括一種細胞乃至一種生物所表達的全部蛋白質。蛋白質組學本質上指的是在大規(guī)模水平上研究蛋白質的特征,包括蛋白質的表達水平,翻譯后的修飾,蛋白與蛋白相互作用等,由此獲得蛋白質水平上的關于疾病發(fā)生,細胞代謝等過程的整體而全方面的認識。蛋白質組的研究不只能為生命活動規(guī)律提供物質基礎,也能為眾多種疾病機理的闡明及攻克提供理論根據和解決途徑。通過對正常個體及病理個體間的蛋白質組比較分析,我們可以找到某些“疾病特異性的蛋白質分子”,它們可成為新藥物設計的分子靶點,或者也會為疾病的早期診斷提供分子標志。確實,那些世界范圍內銷路*的藥物本身是蛋白質或其作用靶點為某種蛋白質分子。因此,蛋白質組學研究不只是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。
定量蛋白質組學技術:定量蛋白質組學是蛋白質組研究的重要內容,通過對基因表達產物——蛋白質的定量分析,以了解基因在不同的生理、病理和逆境條件下的表達情況。近年來,隨著非凝膠技術的發(fā)展,蛋白質組學(“Shotgun”proteomics)技術,特別是多維蛋白質鑒定(MultidimensionalProteinIdentification,MudPIT)已成為研究復雜生物樣本中大規(guī)模蛋白質表達和定性和定量分析的強有力工具。蛋白質組學在醫(yī)學的研究應用:蛋白質組學是研究細胞、組織或生物體中蛋白質組成、定位、變化及其相互作用規(guī)律的科學。蛋白質組學研究不僅是探索生命奧秘的必須工作,也能為人類健康事業(yè)帶來巨大的利益。
蛋白質組學:質譜分析蛋白質組學的基本原理主要是通過測定被測樣品離子的理化性質來進行分析,根據樣品的質量譜圖和相關信息從而得到定性和定量結果。目前,蛋白質組學質譜分析一般是根據保留時間(retentiontime)、質荷比(m/z)、離子強度(intensity)這三個維度對肽蛋白質進行鑒定和定量,即3D蛋白質組學。4D蛋白質組學在3D蛋白質組學的基礎之上增加了第四維度,離子淌度(mobility),主要根據離子的形狀和截面對離子進行分離,能夠區(qū)分m/z差值非常小的肽段,使低豐度蛋白信號能夠被區(qū)分和識別出來。4D蛋白質組學基于timsTOFPro質譜儀,結合PASEF(ParallelAccumulationSerialFragmentation,同步累積連續(xù)碎裂)與TIMS(TrappedIonMobilitySpectrometry,離子遷移譜),可重復測量所有檢測離子的碰撞截面(CCS),能更快、更靈敏的進行蛋白質組定性和定量。蛋白質組的概念與基因組的概念有許多差別。上海醫(yī)學蛋白質組學應用
質譜技術相較于傳統(tǒng)蛋白質鑒定技術而言,擁有靈敏、準確、高通量、自動化等特點。河南外泌體蛋白質組學技術
PRM靶向蛋白質組學:是一種基于Orbitrap為表示的高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,首先利用四級桿質量分析器的選擇能力,用Q1選擇目標肽段的母離子,隨后在collisioncell中對母離子進行碎裂,然后利用Orbitrap分析器在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片信息。這樣能夠對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,即可對目標蛋白質/肽段進行相對(一定)定量。從而實現(xiàn)對復雜樣本中的目標蛋白質/肽段進行準確地特異性分析。河南外泌體蛋白質組學技術
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