單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組關(guān)鍵步驟:單細(xì)胞的分離和捕獲:溫和分離,稀有細(xì)胞。轉(zhuǎn)錄本的捕獲和擴(kuò)增:RNA測序需要0.1-1.0ugtotalRNA,捕獲效率10%(5-**NA測序需要1ngDNA,極限稀釋加移液分離單細(xì)胞;顯微操作分選單細(xì)胞;流式分選帶有表面Marker的單細(xì)胞;激光切割實體組織;微流控技術(shù);磁珠捕獲,主要用于CTC。它的一個優(yōu)點是可以結(jié)合流式細(xì)胞熒光分選(FACS,fluorescentactivatedcellsorting)根據(jù)表面Marker分選細(xì)胞。因此特別適合分選細(xì)胞子集用于測序。它的另一個優(yōu)點是可以獲得細(xì)胞形態(tài)全覽圖,提供另外一個維度的信息,可用于鑒定微孔中是否有損傷的細(xì)胞或雙份細(xì)胞,主要缺點是通量低且每個細(xì)胞所需的工作量相當(dāng)大。轉(zhuǎn)錄組學(xué)可應(yīng)用于炎癥發(fā)生機(jī)制的發(fā)現(xiàn)及干預(yù)。南京轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究
什么是轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序?轉(zhuǎn)錄組廣義上指在某一生理條件下,細(xì)胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)物的組合,包括:mRNA、ncRNA、rRNA等;狹義上指所有mRNA的組合。轉(zhuǎn)錄組測序的研究對象為特定細(xì)胞在某一功能狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和,主要包括mRNA和ncRNA。轉(zhuǎn)錄組具有時間特異性、組織特異性、空間特異性等特點。無參轉(zhuǎn)錄組和有參轉(zhuǎn)錄組的區(qū)別?如果所研究的物種有組裝注釋質(zhì)量較好基因組序列,且和該基因組序列比對效率較高,那么可以采用有參轉(zhuǎn)錄組的分析策略,直接進(jìn)行分析。反之,則需要按照無參轉(zhuǎn)錄組的分析策略進(jìn)行轉(zhuǎn)錄本組裝,構(gòu)建unigene庫,然后進(jìn)行后續(xù)分析。南京轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究轉(zhuǎn)錄組學(xué)檢測范圍廣,高于6個數(shù)量級的動態(tài)檢測范圍。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)(transcriptomics)是功能基因組學(xué)(FunctionalGenomics)研究的重要組成部分,是一門在整體水平上研究細(xì)胞中所有基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。隨著人類基因組計劃HGP(HumanGenomeProject)的完成,科學(xué)家也逐漸認(rèn)識到對基因結(jié)構(gòu)序列的研究只是基因組學(xué)研究的一部分,并不能揭示所有的生命奧秘,所以接下來需要解決的問題是:研究這些基因序列的功能、參與的生命過程、表達(dá)調(diào)控方式,以及這些基因在不同的時空條件下的表達(dá)差異等。這些問題都需要功能基因組學(xué)技術(shù)來解決,而轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)是功能基因組學(xué)研究的重要組成部分。對基因及其轉(zhuǎn)錄表達(dá)產(chǎn)物功能研究的功能基因組學(xué),將為疾病控制和新藥開發(fā)、作物和畜禽品種的改良提供新思路,為人類解決健康問題、食物問題、能源問題和環(huán)境問題提供新方法。
轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究的方法:在早期,由于測序價格昂貴、基因序列數(shù)目有限,轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究者只能進(jìn)行極少數(shù)特定基因的結(jié)構(gòu)功能分析和表達(dá)研究。近十幾年,分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展使高通量分析成為可能,這為真正意義上的轉(zhuǎn)錄組學(xué)的研究奠定了基礎(chǔ)。這些高通量研究方法主要可以分為兩類:一類是基于這類方法包括表達(dá)序列標(biāo)簽技術(shù)、基因表達(dá)系列分析技術(shù)、大規(guī)模平行測序技術(shù)、RNA測序技術(shù)其中,Microarray和EST技術(shù)是較早發(fā)展起來的先驅(qū)技術(shù),SAGE、MPSS和RNA-sea是高通量測序條件下的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究有助于了解特定生命過程中相關(guān)基因的整體表達(dá)情況,進(jìn)而從轉(zhuǎn)錄水平初步揭示該生命過程的代謝網(wǎng)絡(luò)及其調(diào)控機(jī)理。轉(zhuǎn)錄組學(xué)測序可以同時測到mRNA、lncRNA、micRNA以及circRNA么?
RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)優(yōu)勢:RNA-seq技術(shù)可以檢測到低水平表達(dá)、未識別的轉(zhuǎn)錄子和新拼接亞型基因。另一方面,與基因芯片相比,RNA-Seq有一個更廣的檢測動態(tài)范圍,可以研究編碼和非編碼RNA,更易于基因網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建、發(fā)現(xiàn)選擇性剪切轉(zhuǎn)錄物,檢測到等位基因的具體表達(dá)方式,也可以用來提取基因型信息。在RNA-Seq單細(xì)胞研究中,一個主要優(yōu)勢是可以分析整個轉(zhuǎn)錄序列,而不是有限制數(shù)量的基因,并且,研究DNA和RNA的方法并不是相互排斥的,他們可以相互結(jié)合使用,產(chǎn)生更多的生物學(xué)上重要的信息。RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)有著巨大的應(yīng)用前景。哈爾濱高通量轉(zhuǎn)錄組學(xué)定量分析
轉(zhuǎn)錄組學(xué)有高通量、更精確的數(shù)字信號。南京轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究
商務(wù)服務(wù)的發(fā)展在一定程度上可以解決企業(yè)發(fā)展痛點,能夠創(chuàng)造出良好的創(chuàng)業(yè)土壤,讓企業(yè)專注于重點主營業(yè)務(wù),剝離繁瑣的事務(wù)運轉(zhuǎn)。商務(wù)服務(wù)也屬于共享經(jīng)濟(jì)的范疇,可以使企業(yè)共享資源和服務(wù),降低成本。銷售既可以把我們從書本上得來的知識學(xué)以致用,還能在物換星移的時空里激發(fā)我們對生命和世界的熱愛。正如銘刻在希臘圣城德爾斐神殿上的出名箴言——“人啊,認(rèn)識你自己”,在旅途中看到自己的內(nèi)心,生命也因此而豐盛。服務(wù)型結(jié)合當(dāng)?shù)匚幕瘍?nèi)涵,設(shè)計出別致的用戶體驗。如此一來,既能支持非文化事業(yè)的可持續(xù)發(fā)展及傳承,又能讓每一位購買文創(chuàng)禮物的用戶都擁有一份不可替代的專屬回憶。經(jīng)濟(jì)文化不僅在商業(yè)形式和場景上下功夫,隨著不斷的完善還要注重對本土文化資源IP的“夜態(tài)”融合開發(fā),這無疑有提高了有限責(zé)任公司(自然)轉(zhuǎn)型效率。南京轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析研究
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