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浙江磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-02-10

蛋白質(zhì)磷酸化修飾類(lèi)型:根據(jù)磷酸氨基酸殘基的不同,可將磷酸化蛋白質(zhì)分為4類(lèi),即O-磷酸鹽蛋白質(zhì)、N-磷酸鹽蛋白質(zhì)、?;姿猁}蛋白質(zhì)和S-磷酸鹽蛋白質(zhì)。1、O-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)羥氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸)的磷酸化形成。2、 N-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)精氨酸、賴(lài)氨酸或組氨酸的磷酸化形成。3、 ?;姿猁}蛋白質(zhì)通過(guò)天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成。4、 S-磷酸鹽蛋白質(zhì)通過(guò)半胱氨酸磷酸化形成。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù)是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的、根據(jù)特定抗原-抗體的特異性反應(yīng)來(lái)檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白質(zhì)的免疫生化分析方法。乙?;揎検求w內(nèi)高度保守的可逆轉(zhuǎn)的蛋白修飾。浙江磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

翻譯后修飾蛋白組學(xué)分析:在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過(guò)程中,蛋白會(huì)首先被酶切成肽段,然后進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。通過(guò)質(zhì)譜分析,得到的是一系列肽段的分子質(zhì)量信息。對(duì)于某一個(gè)特定肽段而言,在沒(méi)有發(fā)生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的。當(dāng)它發(fā)生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的。在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個(gè)磷酸根的分子量,假設(shè)這個(gè)肽段就發(fā)生了磷酸化修飾,再通過(guò)二級(jí)質(zhì)譜圖進(jìn)行二次確認(rèn)。南京糖基化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)價(jià)格蛋白質(zhì)修飾可檢測(cè)修飾類(lèi)型有磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙?;?、丁?;?、丙二?;?。

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué):蛋白質(zhì)翻譯后修飾(Post-translational modification, PTM)是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。它通過(guò)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基加上修飾基團(tuán),可以改變蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì),進(jìn)而影響蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象和活性狀態(tài)、亞細(xì)胞定位、折疊及其穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的豐度變化在生命活動(dòng)研究中具有重大意義,異常的翻譯后修飾會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。質(zhì)譜可以分辨蛋白質(zhì)修飾前和修飾后分子量上的變化,因此只要知道靶蛋白翻譯后修飾前后分子量的變化,就能對(duì)翻譯后修飾方式進(jìn)行鑒定和定量。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法:免疫印跡技術(shù):技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)。1、 檢測(cè)特異性高。2、能夠特異鑒定單個(gè)磷酸化位點(diǎn)。同位素標(biāo)記(Isotope Labeled)結(jié)合免疫印跡法:此方法的原理是當(dāng)?shù)鞍装l(fā)生磷酸化時(shí),放射性32P的摻入和分子質(zhì)量變化引起的凝膠遷移(gelshift),再通過(guò)免疫印跡方法檢測(cè)同位素標(biāo)記,從而達(dá)到鑒定磷酸化蛋白的目的。技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn):1、檢測(cè)技術(shù)靈敏并且直觀。2、常用于體外磷酸化反應(yīng)結(jié)果檢測(cè)。3、 磷酸化鑒定不受抗體限制。4、可同時(shí)分析多個(gè)蛋白磷酸化。蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法有免疫印跡技術(shù)。

蛋白質(zhì)乙?;揎椂x:蛋白質(zhì)在細(xì)胞中經(jīng)過(guò)翻譯后,到被運(yùn)輸?shù)较鄳?yīng)的細(xì)胞器并且發(fā)生特定的生物學(xué)作用前會(huì)經(jīng)過(guò)很重要的一步加工,那就是蛋白質(zhì)翻譯后修飾加工。蛋白質(zhì)翻譯后修飾的作用主要是改變蛋白質(zhì)的活性、定位或功能。通過(guò)蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動(dòng)的多樣性和復(fù)雜性。常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化,乙?;腔?,泛素化等。蛋白質(zhì)乙?;揎?,顧名思義指的就是在蛋白質(zhì)原有基礎(chǔ)上面嫁接上乙酰化基團(tuán)。在細(xì)胞中,乙?;揎椀姆磻?yīng)由乙?;D(zhuǎn)移酶所催化,將乙酰輔酶A的乙?;D(zhuǎn)移并添加在蛋白質(zhì)賴(lài)氨酸殘基上。在早期的研究中,乙?;揎椧恢北徽J(rèn)為是真核細(xì)胞所特有的一種翻譯后修飾,直到后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)原核細(xì)胞中年也存在著蛋白質(zhì)乙?;揎棥K?,乙?;揎検窃撕驼婧松锼灿械囊环N翻譯后修飾類(lèi)型。質(zhì)譜是蛋白質(zhì)翻譯后修飾檢測(cè)的常用技術(shù)之一。上海蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)研究

蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)中磷酸化位點(diǎn)分析時(shí)應(yīng)該注意些什么問(wèn)題?浙江磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)分析:基于LC-MS/MS分析能夠精確測(cè)定蛋白質(zhì)或多肽分子質(zhì)量這一特性,從而檢測(cè)蛋白質(zhì)或者多肽上位點(diǎn)發(fā)生何種修飾??蓹z測(cè)修飾類(lèi)型如下: 磷酸化、糖基化、乙?;?、泛素化、丙?;?、丁?;?、丙二?;⑽於;?、琥珀?;?、單甲基化、二甲基化、三甲基化。1、磷酸化:信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)理等;2、糖基化:蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等;3、乙?;夯虮磉_(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性的病變等;4、泛素化:細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等;5、甲基化:染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等;6、丙酰化 / 丙二?;?/ 戊二酰化 / 琥珀?;褐饕嬖谟诰€(xiàn)粒體和細(xì)菌中,與代謝過(guò)程密切相關(guān)。浙江磷酸化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)

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