蛋白翻譯后修飾組學(xué)技術(shù)在準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用：盡管目前大數(shù)據(jù)的獲得會(huì)采用基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)，但是關(guān)鍵的發(fā)現(xiàn)還是依賴(lài)蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)而得到的。近來(lái)越來(lái)越多的研究表明蛋白組學(xué)驅(qū)動(dòng)的準(zhǔn)確的醫(yī)學(xué)具有極大的實(shí)用性和普適性，蛋白組學(xué)的研究更加速了臨床轉(zhuǎn)化的進(jìn)程。蛋白翻譯后修飾（post-ranslational modification, PTM)賦予了蛋白種類(lèi)的豐富性及蛋白功能的多樣化，研究蛋白翻譯后修飾不只可以確定蛋白修飾（磷酸化、泛素化、酰化、甲基化、SUMO化等）或蛋白酶裂解的新位點(diǎn)，還可以發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記物及探索藥物/化學(xué)調(diào)節(jié)物的作用機(jī)制。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾調(diào)控著底物的酶活性、功能以及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。四川蛋白質(zhì)琥珀?；揎椊M學(xué)領(lǐng)域

蛋白質(zhì)磷酸化修飾組學(xué)：蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是生物體內(nèi)重要的共價(jià)修飾方式之一。磷酸化修飾本身所具有的簡(jiǎn)單、靈活、可逆的特性，以及磷酸基團(tuán)的供體ATP的易得性，使得磷酸化修飾被真核細(xì)胞所選擇接受成為一種比較普遍的調(diào)控手段。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化這一可逆過(guò)程，幾乎調(diào)節(jié)著包括細(xì)胞的增殖、發(fā)育、分化、細(xì)胞骨架調(diào)控、細(xì)胞凋亡、神經(jīng)活動(dòng)、肌肉收縮、新陳代謝發(fā)生等生命活動(dòng)的所有過(guò)程，并且可逆的蛋白質(zhì)磷酸化是目前所知道的比較主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)方式。目前已經(jīng)知道有許多人類(lèi)疾病是由于異常的磷酸化修飾所引起，而有些磷酸化修飾卻是某種疾病所導(dǎo)致的后果。貴陽(yáng)蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行共價(jià)加工的過(guò)程。

蛋白質(zhì)學(xué)組翻譯后修飾的研究策略：自中而下：自中而下的分析方法是自下而上分析方法的一種替代方法，分析組蛋白時(shí)其原理類(lèi)似于自下而上分析策略。在使用這種分析方法時(shí)，通常需要將被檢測(cè)蛋白質(zhì)消化成3-9kDa范圍內(nèi)的肽段，因此也無(wú)法保證檢測(cè)到的肽段的完整性。但是，由于儀器的進(jìn)步和保留了組蛋白尾部的組合修飾，自中而下分析法正逐漸受到歡迎。自中而下更接近于自下而上法的靈敏度。自上而下：自上而下技術(shù)可以直接對(duì)完整的蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)序，包括翻譯后修飾的蛋白質(zhì)和其他大的蛋白質(zhì)片段，而不只是肽段。這可以比較大程度地保留與PTMs相關(guān)的信息，使其適用于組蛋白的全方面表征和分析。自上而下技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)的有效分辨率已達(dá)到229kDa，一次可以檢測(cè)到的蛋白質(zhì)數(shù)量也在增加。

什么是蛋白質(zhì)的翻譯后修飾？蛋白質(zhì)的翻譯后修飾（）是指蛋白質(zhì)在翻譯后的化學(xué)修飾。對(duì)于大部分的蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，這是蛋白質(zhì)生物合成的較后步驟。PTM是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要組成部分。通過(guò)向修飾基團(tuán)添加一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基或通過(guò)蛋白質(zhì)水解切割該基團(tuán)來(lái)改變蛋白質(zhì)的性質(zhì)，是蛋白質(zhì)生物學(xué)功能表達(dá)的重要步驟。生物蛋白質(zhì)的翻譯后修飾極大地增加了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的類(lèi)型和功能。這個(gè)過(guò)程調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄，并影響表觀遺傳學(xué)。常見(jiàn)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾包括磷酸化。

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法： Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳：Mn2+-Phos-tag SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳通過(guò)連接在丙烯酰胺分子上的雙核金屬（如Mn2+）配合物對(duì)磷酸基團(tuán)的親和，造成磷酸化蛋白遷移的滯留，再將電泳結(jié)果轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用相應(yīng)蛋白的抗體識(shí)別，根據(jù)遷移滯留檢測(cè)蛋白磷酸化。技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：1、無(wú)放射危害。2、鑒定不受限于特異性識(shí)別蛋白質(zhì)磷酸化的抗體。3、適用于大規(guī)模磷酸化蛋白分析。4、與質(zhì)譜鑒定兼容，進(jìn)行更為精細(xì)的分析鑒定。蛋白質(zhì)乙?；揎椊M學(xué)技術(shù)對(duì)細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的刺激有著重要的作用。蛋白質(zhì)亞硝基化修飾組學(xué)研究

通過(guò)蛋白質(zhì)翻譯后修飾也進(jìn)一步增加了細(xì)胞通路機(jī)制和生命活動(dòng)的多樣性和復(fù)雜性。四川蛋白質(zhì)琥珀酰化修飾組學(xué)領(lǐng)域

蛋白質(zhì)磷酸化修飾鑒定方法：質(zhì)譜鑒定法：在質(zhì)譜分析中，先使試樣中各組分電離生成不同荷質(zhì)比的離子，然后經(jīng)加速電場(chǎng)的作用，生成離子束，進(jìn)入質(zhì)量分析器。在質(zhì)量分析器中，在磁場(chǎng)的作用下，質(zhì)荷比相同的離子會(huì)被聚焦到同一點(diǎn)上，不同質(zhì)荷比的離子聚焦于不同點(diǎn)上，因此獲得區(qū)分不同質(zhì)荷比離子的質(zhì)譜圖。與未經(jīng)修飾的肽段相比，磷酸基團(tuán)修飾的肽段在相對(duì)分子質(zhì)量上就會(huì)增加79.983，由此在質(zhì)譜圖中能夠與未修飾肽段進(jìn)行區(qū)分。固相金屬離子親和色譜利用的是磷酸基團(tuán)與固相化的金屬離子有高親和力,可有效吸附磷酸化基團(tuán)，從而達(dá)到富集磷酸化肽段的效果。鰲合底物上的金屬離子通常是Fe3+或Ga3+，可以選擇性地與磷酸化肽中的磷酸部分相結(jié)合,并且在高pH或磷酸緩沖液中磷酸化肽可以釋放出來(lái)。但是這個(gè)方法不能夠有效富集不與IMAC結(jié)合的磷酸化肽段。四川蛋白質(zhì)琥珀?；揎椊M學(xué)領(lǐng)域

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