通過結(jié)果的生物學(xué)意義對結(jié)果質(zhì)量進行評估?當(dāng)所有具生物學(xué)意義的參數(shù)在測試中表現(xiàn)出較小的可變性時則方法學(xué)可變性亦較低方法學(xué)可變性低則結(jié)果質(zhì)量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀評估獲得的數(shù)值進行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運動性上具有較好的相關(guān)性而·131·中國優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10.13404/j.cnki.cjbhh.2002.06.091在前向運動精子百分率上的相關(guān)性較低]。Holt等報道了在常規(guī)實驗條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對**參數(shù)值進行比較,其結(jié)果為:采用同一個測定池由不同的操作者測定**參數(shù);變異系數(shù)(CV)是29%?活動精子比率的CV為24%?平均路徑速度(VAP)的CV為43?85%。作者們指出該分析結(jié)果不應(yīng)看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實際上它揭示了操作者的錯誤是差異的主要來源。目前有待于尋找進一步的標(biāo)準(zhǔn)來評估CASA變量的結(jié)果質(zhì)量。精子***的生物學(xué)功能是使卵細胞授精?因此用夫婦中的授精結(jié)果來考察精子運動性是合理的?只有在該基礎(chǔ)上能夠確定活動性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(shù)(授精IVF)的發(fā)展使檢測精子質(zhì)量與各參數(shù)間的關(guān)系的比較成為可能;同樣可以驗證CASA測定結(jié)果與精子真實質(zhì)量間的相關(guān)性有利于CASA結(jié)果質(zhì)量的提高。精子分析,直線速率(VSL)?:精子頭在開始檢測時的位置與終止所處位置之間的直線運動的時均速率。廣州馬精子分析高準(zhǔn)確率
通過比較進行質(zhì)量評估1.室內(nèi)比較是采用同一個標(biāo)本在同一參數(shù)下?經(jīng)CASA多次測定后?應(yīng)用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法對測得數(shù)值進行比較。在男科實驗室中對CASA系統(tǒng)的質(zhì)量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標(biāo)本進行日間比較。當(dāng)室內(nèi)比較作為結(jié)果質(zhì)量的一種評估時?計算機中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢的。2.室間比較要求標(biāo)本向其他幾個實驗室運送文獻中的一些報道闡述了該方面的經(jīng)驗但是運動精子是不能在不受限制的條件下運輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\送需進一步考慮更多的因素(解凍技術(shù)、標(biāo)本的處理等)這些因素會影響活動力參數(shù);到目前為止室間比較的研究還未見滿意報道;Jorgensen等進行了研究嘗試克服實驗室間運送解凍標(biāo)本的困難其研究方式是:邀請四個實驗室的實驗人員攜帶各自的儀器到同一個地點以各自通常采用的實驗方法進行精子評估但未見明確的結(jié)論。3.對于精子活力測定CASA系統(tǒng)的測定與直觀評估的比較有文獻進行了報道但結(jié)果并不相同。認為直觀評估揭示標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯誤引起的該觀點是不正確的;無論從理論上還是實踐中CASA數(shù)值比直觀評估所獲得的數(shù)值更接近于真值;對直線前進的精子比例而言這一點是非常正確的。CASA精子分析精子動力分析全自動精子分析儀極大提高臨床檢驗水平,廣泛應(yīng)用于泌尿科,男性科以及計劃生育、優(yōu)生優(yōu)育研究等。
美國HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國內(nèi)外毒理學(xué)實驗室所使用。本試驗研究目的對精子分析儀和血細胞計數(shù)板在大鼠附睪精子計數(shù)結(jié)果的比較驗證。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對三批次雄鼠的精子計數(shù)進行比較。健康雄鼠通過戊巴比妥鈉麻醉實施安樂死后,取左側(cè)附睪尾稱重,將附睪尾部放入37℃預(yù)熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOXIVOS精子分析儀載物臺,進行精子計數(shù),同時吸取稀釋后的精子懸液滴入血細胞計數(shù)板內(nèi),通過光學(xué)顯微鏡進行計數(shù),比較兩種計數(shù)方法的差異性。結(jié)果***批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結(jié)果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結(jié)果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細胞計數(shù)器的精子計數(shù)結(jié)果分別為165.9±91.7,140.0±59.6。三個批次的精子分析儀和血細胞計數(shù)板的精子計數(shù)結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論精子分析儀是一種方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理學(xué)研究中具有重要的應(yīng)用價值。
CASA系統(tǒng)雖然有諸多優(yōu)點,但是很多因素都會影響到CASA儀器的使用及準(zhǔn)確性。CASA系統(tǒng)進行**分析應(yīng)注意以下幾點:3.1標(biāo)本的采集與制作(1)采集前禁欲2?7天,禁欲時間過長、過短對**質(zhì)量都有一定影響。(2)容器要清潔。(3)特殊情況下,*可使用專門為采集**設(shè)計的無毒性避孕套,普通的乳膠避孕套因含有損害精子活力的物質(zhì)不可使用。(4)注意保溫(20?37℃),并于30分鐘內(nèi)送檢驗科。(5)標(biāo)本置于37℃水浴.精子運動參數(shù)具有溫度敏感性,因此要求計數(shù)池應(yīng)于分析儀恒溫板上預(yù)溫。(6)密切注意**液化的情況,確保液化時間準(zhǔn)確,因**樣本隨放置時間的延長,精子活動力及活動率有減少的趨勢。標(biāo)本液化后取混勻樣本**1滴滴在樣品池中間,然后進行分析。(7)檢測精子活動力,標(biāo)本密度應(yīng)控制在2×106/ml到50×106/ml之間。具有高密度(如高于50×106/ml)精子的標(biāo)本,通常會增加碰撞的頻率,并可能由此出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。在這種情況下,建議用同源精漿稀釋標(biāo)本。在男科和輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域,精子質(zhì)量的評估是診斷和處理的重要環(huán)節(jié)。
九、精液酸堿度(pH)檢查[正常參考值]7.2-8.0。[臨床意義]1.精液pH值<7.0,多見于少精或無精癥,常反映輸精管道阻塞、先天性精囊缺如或附睪病變等。2.精液pH值>8.0,常見于急性***,如精囊炎、前列腺炎等。十、男性生育力指數(shù)測定[計算公式]I=M(N×V)/(A×106)式中I為男性生育力指數(shù);M為活動精子百分率;N為每毫升的精子數(shù);V為精子運動的速度;A為畸形精子的百分率。[正常參考值]正常人生育力指數(shù)>l。[臨床意義]1.生育指數(shù)為0,表明完全無生育能力。2.生育指數(shù)為0-1之間,表明有不同程度的生育障礙。HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),擺動性(WOB)?:實際的曲線路徑關(guān)于平均路徑的擺動值。廣州兔子精子分析VAP
IVOS和CEROS集成了智能化的分析軟件,能夠自動識別和計算精子的各項參數(shù),減少了人工操作的誤差。廣州馬精子分析高準(zhǔn)確率
1.基本檢查:是確定精液變量穩(wěn)定的常規(guī)方法,不僅是男科實驗室,任何開展精液檢查的實驗室都能遵循。精子計數(shù)依然推薦使用改良Neubauer血細胞計數(shù)板的方法,但計數(shù)的方法有了改變。明確推薦了伊紅笨胺黑染色法作為精子存活率診斷的優(yōu)先方法,伊紅染色和低滲腫脹實驗只作為備選方法。刪減了參考值下限的描述。對于精子活動率大于40%的樣本沒有必要做存活率評估。與第5版手冊中淡粉色判讀為活精子不同,明確了只有精子頭為白色的精子為活精子、淡粉色為死精子。臨床數(shù)據(jù)表明,鑒別快速前向運動精子非常重要。因此,關(guān)于精子活力分級,第6版手冊建議恢復(fù)到快速前向運動、慢速前向運動、非前向運動和不活動4個活力級別,但精子活動率的參考值范圍卻依然是按前向運動(PR)、非前向運動(NP)、不活動(IM)3個活力級別計算。第6版手冊強調(diào),精子形態(tài)學(xué)評估的價值不僅在于其可用于判斷自然妊娠和輔助生殖技術(shù)(ART)結(jié)局的預(yù)后,還可以為男性生殖***包括睪丸和附睪功能判斷提供更多診斷信息。對于3%和5%的精子“正?!毙螒B(tài)率的判斷,則要求必須由訓(xùn)練有素的人員評估1500個精子來完成;對于無尾精子(只有頭部的精子)超過總精子數(shù)20%的精液,應(yīng)單獨計算并在報告中注明;廣州馬精子分析高準(zhǔn)確率